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以人载脂蛋白B为靶点的基因表达下调剂筛选模型的建立与应用

         

摘要

目的 构建以人ApoB为靶点的基因表达调节剂的高通量筛选模型,筛选apoB基因表达下调剂.方法 以人基因组DNA为模板,通过PCR扩增apoB基因上游的启动子序列,将扩增的DNA片段克隆至荧光素酶报告基因质粒pGL4.17,采用脂质体介导的方法将重组质粒转染人肝癌细胞HepG2,经G418抗性筛选,获得稳定转染细胞株.应用槲皮素对筛选模型进行评价,进而基于检测荧光素酶的表达活性变化筛选人apoB基因表达下调剂.结果 PCR扩增得到人apoB基因上游的启动子序列,构建完成相应的重组荧光素酶报告基因质粒pGL4-apoB-P,建立了稳定转染细胞株ApoB-Luc HepG2.以槲皮素为阳性化合物进行模型评价,Z因子为0.77,符合高通量筛选的要求.应用该模型对5688个微生物发酵液粗提物进行筛选,获得了2株阳性菌株.结论 建立了人apoB基因表达下调剂筛选模型,并应用于微生物来源样品的筛选.

著录项

  • 来源
    《中国抗生素杂志》 |2021年第10期|922-927|共6页
  • 作者单位

    国家卫健委抗生素生物工程重点实验室 中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所 北京100050;

    国家卫健委抗生素生物工程重点实验室 中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所 北京100050;

    国家卫健委抗生素生物工程重点实验室 中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所 北京100050;

    国家卫健委抗生素生物工程重点实验室 中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所 北京100050;

    国家卫健委抗生素生物工程重点实验室 中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所 北京100050;

    中国医学科学院药物合成生物学重点实验室 中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所 北京100050;

  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类 治疗传染病及寄生虫病药物;
  • 关键词

    载脂蛋白B; 动脉粥样硬化; 报告基因; 启动子; 高通量筛选; 微生物发酵液;

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