目的通过网络药理学、分子对接和实验验证探究何首乌-虎杖治疗脑小血管病(cerebral small vessel disease,CSVD)的作用机制。方法运用TCMSP数据库筛选何首乌和虎杖的化学成分及相关靶点蛋白,在GeneCards和OMIM数据库获取痴呆、中风、健忘相关靶点,通过Cytoscape构建中药-活性成分-靶点网络图和蛋白相互作用图,再利用DAVID数据库对作用靶点进行京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路富集。利用Autodock将关键有效成分和重要靶点进行分子对接,评估其结合活性。最后采用β-淀粉样多肽1-42(amyloidβ_(1-42),Aβ_(1-42))诱导BV-2细胞构建阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)细胞模型,采用Western blot法研究何首乌-虎杖对AD细胞模型关键靶点表达的影响。结果筛选出24个化学成分,120个活性成分-疾病共有靶点。KEGG结果涉及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(phosphatidylinositol 3-kinase and protein kinase B,PI3K-Akt)、丝裂原激活蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)、白介素-17(interleukin-17,IL-17)、缺氧诱导因子(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)等多条炎症相关信号通路。筛选出槲皮素、大黄素、β-谷甾醇、大黄素甲醚、芹菜素5个关键化学成分,c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)、TNF-α、细胞肿瘤抗原p53(cellular tumor antigen p53,P53)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)和表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)5个关键靶点。分子对接结果显示,上述化合物与靶点的结合能均为负值。实验验证结果显示,何首乌-虎杖能显著抑制AD细胞模型5个关键靶点的表达。结论何首乌-虎杖可能通过调节核心靶点JNK、TNF-α、P53、IL-6抑制炎症反应、抑制细胞凋亡,从而发挥治疗CSVD作用。
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