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丹皮酚对脂多糖刺激的RAW264.7细胞炎症与自噬的影响

         

摘要

目的:以脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激的RAW264.7细胞,以自噬诱导剂雷帕霉素(rapamycin,Rap)促进自噬为主要模型,研究丹皮酚(paeonol,P)对RAW264.7自噬与免疫功能的影响.方法:使用LPS 1μg·ml-1刺激RAW264.7细胞6 h,丹皮酚200μmol/L处理12 h,Rap 100 ng·ml-1作用6 h,蛋白免疫印迹法(western blot,WB)检测自噬相关因子LC3B、Beclin、P62和炎症相关因子TNF-α、IL-1β的表达水平,激光共聚焦荧光共定位法(immunofluorescence,IF)检测LC3B、P62蛋白的荧光表达和定位;酶联免疫分析(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测RAW264.7细胞TNF-α 的分泌.结果:在脂多糖诱导RAW264.7炎症反应的细胞模型中,添加丹皮酚药物后LC3B、Beclin表达增多,P62表达减少,LC3B-l向LC3B-ll的转换效率增强;雷帕霉素抑制IL-1β、TNF-α的表达,与丹皮酚联用进一步抑制IL-1β、TNF-α的表达和分泌.结论:丹皮酚通过促进细胞自噬来抑制炎症反应,丹皮酚与雷帕霉素联用加强了对炎症的抑制作用.

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