摘要：
目的:探究调节自噬活性对兔眼准分子激光角膜切削术(PRK)术后角膜上皮下雾状混浊(haze)的影响。方法:新西兰大白兔64只行右眼PRK手术后,根据术后局部用药不同,随机分为4组:单纯手术组、14μmol/L二甲基亚砜组(DMSO)、50μmol/L雷帕霉素组、100μmol/L雷帕霉素组,每组16只。根据分组情况,术后2h开始给予上述滴眼液治疗,每天3次,1次1滴,持续7d,另选取16只兔为正常对照组。术后每天用手持裂隙灯显微镜照相系统,观察兔眼术后炎症反应及角膜上皮愈合情况。裂隙灯显微镜照相系统采集PRK术后1、4wk时各组兔眼haze的形成情况。各组分别于术后1、4wk采用空气栓塞法处死8只兔子,摘取角膜组织,冻存备用。免疫组化检测转化生长因子-β1(TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达水平。Real Time-PCR技术检测自噬因子-5(ATG5)、自噬因子-12(ATG12)、B淋巴细胞瘤基因-2(Bcl-2)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase3)基因的相对表达量。结果:PRK术后兔眼角膜上皮均在3~4d完全愈合,各组兔眼术后角膜上皮愈合时间比较无差异(F=0.745,P=0.530)。在观察期间,各组术后haze均于4wk时最明显,单纯手术组和14μmol/L DMSO组haze症状均较严重,其次为50μmol/L雷帕霉素组,100μmol/L雷帕霉素组haze症状较其他组明显减轻,各组兔眼术后不同时间点haze分级比较有差异(均P<0.05)。免疫组化显示,术后1、4wk,单纯手术组和14μmol/L DMSO组TGF-β1、MMP-2和α-SMA的表达均较强,其次为50μmol/L雷帕霉素组,100μmol/L雷帕霉素组较其他组表达明显减弱(均P<0.05)。PCR法检测显示,术后1、4wk,50、100μmol/L雷帕霉素组ATG5、ATG12和Bcl-2 mRNA相对表达量较单纯手术组和14μmol/L DMSO组明显升高(均P<0.05);50、100μmol/L雷帕霉素组Caspase3 mRNA相对表达量较单纯手术组和14μmol/L DMSO组明显降低(均P<0.05)。结论:雷帕霉素可以增强自噬水平,抑制凋亡水平,从而减轻兔眼PRK术后haze的形成。
