用RNase Ⅲ制备的小干涉RNA降解SARS冠状病毒基因的细胞内转录物

朱旭东; 党颖; 冯怡; 李涛; 黄培堂

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SARS冠状病毒是引起重症急性呼吸综合症的主要原因,目前尚没有特效药物或疫苗对抗这种新病毒.RNA干涉是指双链RNA可以特异地降解细胞内同源基因的mRNA.在哺乳动物细胞中,<30bp的小双链RNA能引起RNA干涉,又可以避免干扰素反应.通过体外转录得到SARS病毒3种基因RNA依赖的RNA聚合酶、刺突蛋白及核衣壳蛋白部分片段的长双链RNA,然后用RNase Ⅲ有限切割成长度<30bp的小干涉RNA.同时把上述3种基因片段分别连接到质粒pGL3-Control中,得到的3个质粒pGL-R、pGL-S和pGL-N可以分别在细胞内转录出荧光素酶-RNA依赖的RNA聚合酶、-刺突蛋白、-核衣壳蛋白的杂合mRNA.上述质粒分别和相应的小干涉RNA共转染HEK293F细胞,测定荧光素酶活性,结果小干涉RNA使相应质粒表达荧光素酶的活性显著下降;用逆转录定量PCR反应测量mRNA丰度,结果表明上述小干涉RNA可以特异地降解相应的病毒基因转录物.

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来源
《生物工程学报》 |2004年第4期|484-489|共6页
作者
朱旭东; 党颖; 冯怡; 李涛; 黄培堂;
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作者单位

北京生物工程研究所,北京,100071;

北京生物工程研究所,北京,100071;

北京生物工程研究所,北京,100071;

北京生物工程研究所,北京,100071;

北京生物工程研究所,北京,100071;

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正文语种 chi
中图分类人体病毒学（致病病毒）;
关键词
SARS冠状病毒; RNA干涉; RNA依赖的RNA聚合酶; 刺突蛋白; 核衣壳蛋白;

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