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组织因子途径抑制物基因转移对大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响

         

摘要

目的研究组织因子途径抑制物(TFPI)基因转移对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡的影响,探讨其抑制血管成形术后再狭窄的机制。方法在体外培养的大鼠VSMC中分别转染含有人TFPI基因的重组腺病毒(Ad-TFPI)、含β-半乳糖苷酶基因的重组腺病毒(Ad-LacZ)或PBS。通过RT-PCR方法检测外源TFPI基因的表达。细胞计数和MTF法测定细胞生长情况。电镜技术、流式细胞仪和TUNEL法分别检测细胞凋亡情况。结果基因转移后3 d在VSMC中检测到TFPI mRNA的表达。细胞计数结果显示第1、3、5天各组细胞数无明显差异,而第7天Ad-TFPI组细胞数明显少于Ad-LacZ组和PBS组(P<0.05)。MTY结果显示基因转移后第1、3、5天各组细胞的吸光度值比较差异无统计学意义,而第7天Ad-TFPI组的吸光度值明显低于Ad-LacZ组(P<0.05)和PBS组(P<0.01)。流式细胞仪检测结果显示基因转移后3、5、7 d Ad-TFPI组细胞早期凋亡结果均高于Ad-LacZ组。基因转移后3 d和7 d,Ad-TFPI组TUNEL阳性率分别为(10.82±1.57)%和(16.95±2.01)%,明显高于Ad-LacZ组(3.46±0.93)%和(5.11±1.29)%(P<0.05)。透射电镜结果显示基因转移后3、5、7 d Ad-TFPI组细胞逐渐出现体积变小、线粒体轻度肿胀、核固缩以及凋亡小体形成,而Ad-LacZ组则无明显改变。结论 TFPI基因转移能够显著诱导体外培养的大鼠VSMC发生凋亡,可能是其抑制血管成形术后再狭窄的机制之一。

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