针对肠道病毒71型的新型重组融合蛋白类病毒颗粒疫苗研制及其免疫效果评价

蔡静; 顾春燕; 张锋; 高孟; 高丽美; 罗永能

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目的研制针对肠道病毒71型（EV71）的新型重组类病毒颗粒疫苗,并评价其免疫效果。方法利用诺如病毒（NoV）衣壳蛋白（VP1）P区（NoVP）可呈现外源抗原并形成类病毒颗粒的特点,构建获得只包含NoVP或在其表面环位点串联插入EV71衣壳蛋白的三个特异性抗原位点（VP1的SP55和SP70,VP2的VP2-28）基因片段,克隆至质粒pET-28a（+）后分别转化大肠杆菌后诱导表达,通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）、免疫印迹和透射电镜鉴定和观察表达的重组融合蛋白（NoVP+EV71-SP55-SP70-VP2-28）和NoVP蛋白。同时,采用随机分组法将BALB/C小鼠分成A、B和C三组,每组10只,分别用重组融合蛋白（NoVP+EV71-SP55-SP70-VP2-28）、NoVP和透析液免疫获得抗血清,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测小鼠血清中特异性抗体;将小鼠血清与EV71 H3-TY株混合,加入Vero细胞,通过微量中和实验检测特异性抗体效价。采用方差分析和Bonferroni检验对数据进行分析。结果重组表达产物在大肠杆菌中以包涵体形式存在,SDS-PAGE显示重组融合蛋白和NoVP相对分子质量约为43×10~3和36×10~3;免疫印迹显示重组融合蛋白在相对分子质量约为43×10~3处有特异性条带,透射电镜观察显示重组融合蛋白呈现类病毒颗粒。ELISA显示与SP70多肽反应的小鼠血清吸光度(A490)值A组明显大于B组和C组（F=13.860,P＜0.05）;微量中和实验显示A组小鼠血清针对EV71 H3-TY株的几何平均中和滴度为1:38。结论本研究初步获得了针对EV71的一种新型重组融合蛋白类病毒颗粒疫苗,其具有良好的抗原性和特异性,能诱导小鼠产生较高中和滴度的特异性抗体。

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来源
《中华临床感染病杂志》 |2017年第4期||共页
作者
蔡静; 顾春燕; 张锋; 高孟; 高丽美; 罗永能;
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作者单位

浙江省医学科学院病毒病研究所;

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正文语种 chi
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关键词
肠道病毒属; 肠道病毒71型; 诺如病毒; 酶联免疫吸附测定; 类病毒颗粒疫苗; 微量中和实验;

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