目的:筛选有效抑制T24细胞survivin表达的siRNA序列,并构建其质粒载体,为后续研究提供基础.方法:设计并合成针对survivin的siRNA,转染T24细胞.用RT-PCR方法测定干扰后细胞survivin mRNA表达,Western-blot方法测定干扰后survivin蛋白表达,比较其抑制率,筛选出有效抑制靶基因表达的siRNA,并构建相应的质粒载体(shRNA).结果:①siRNA转染T24细胞有较高的转染效率;②半定量RT-PCR:1号siRNA干扰T24细胞48 h后survivin基因mRNA表达最低,有显著差异(P＜0.05),抑制率70%左右.③Western-blot:1号siRNA干扰T24细胞72 h后survivin蛋白表达最低,有显著差异(P＜0.05),抑制率60%左右.④Western-blot方法测定T24细胞转染1号siRNA后连续7 d survivin蛋白表达量变化:干扰后48～96 h survivin蛋白表达量最低,有显著差异(P＜0.05).⑤以1号siRNA序列构建质粒栽体并转染T24细胞成功,转染效率较高,质粒本身对细胞无毒无害.结论:①所设计、合成的siRNA中,1号survivin-siRNA对T24细胞survivin表达有明显抑制作用;②根据实验结果构建的质粒裁体及其对照质粒可用于T24细胞转染,供进一步实验研究.
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