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抗牙龈卟啉单胞菌卵黄抗体的制备、纯化和生物学特性鉴定

         
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摘要

AIM:To prepare egg yolk immunoglobulin ( IgY) against Porphyromonas gingivalis and to study its biological characteristics. METHODS:Ten 150 day-old laying hens were immunized with Porphyromonas gingi-valis and IgY was isolated from the egg yolk by the water dilution ( WD) method and 2 steps of ammonium sulfate puri-fication. The titers and specificity of the purified antibodies were assessed by ELLSA. The molecular weight were meas-ured by SDS-PAGE. The antigenicity and function of the IgY were demonstrated by western blotting and the hemag-glutination inhibition ( HI) test respectively. RESULTS:The yield of IgY was 70 mg per yolk with the purity of 65%. Its titer was 25 600. Pg-IgY could bound specifically to Porphyromonas gingivalis and could inhibit the hemagglutina-tion at 3. 125 μg/well. CONCLUSION:The production and purity of IgY are high, the IgY has strong specificity a-gainst T Porphyromonas gingivalis.%目的:制备特异性抗牙龈卟啉单胞菌( Pg)的鸡卵黄免疫球蛋白( IgY)并检测其生物学特性. 方法:厌氧培养牙龈卟啉单胞菌,将甲醛灭活的菌体经翅膀下浅层肌肉免疫150日龄罗曼母鸡3次,每次间隔10 d. 取鸡蛋用两步硫酸铵沉淀法提取IgY,BCA法测定蛋白质含量,ELLSA法检测纯化后IgY的特异性和抗体效价变化,并进行 SDS-PAGE 和 Western blotting 分析. 观察抗 Pg-IgY 对红细胞凝集的抑制作用.结果:经3次免疫后,抗体滴度最高可达25 600,纯化后每个鸡蛋可得约70 mg IgY抗体;SDS-PAGE分析,纯化的IgY有1条主要蛋白带,相对分子质量( Mr)为180 kD,纯度为65%; Western blotting分析, 该IgY抗体可识别抗原Pg. 每孔3. 125 μg Pg-IgY可有效抑制Pg的红细胞凝集活性;1 mg/mL Pg-IgY可有效抑制Pg生长.结论:本研究得到的IgY特异性强,产量和纯度高.

著录项

  • 来源
    《牙体牙髓牙周病学杂志》 |2015年第8期|459-464,497|共7页
  • 作者

    董瑶; 徐燕; 马倩; 孟明理; 沈继龙; 徐振山; 宋礼华;

  • 作者单位

    安徽 合肥230032 安徽医科大学口腔医学院 安徽医科大学附属口腔医院牙周黏膜科 安徽省口腔疾病研究中心实验室;

    安徽 合肥230032 安徽医科大学口腔医学院 安徽医科大学附属口腔医院牙周黏膜科 安徽省口腔疾病研究中心实验室;

    安徽 合肥230032 安徽安科生物工程(集团)股份有限公司;

    安徽 合肥230032 安徽医科大学口腔医学院 安徽医科大学附属口腔医院牙周黏膜科 安徽省口腔疾病研究中心实验室;

    安徽 合肥230032 安徽医科大学人兽共患病安徽省重点实验室;

    安徽 合肥230032 安徽安科生物工程(集团)股份有限公司;

    安徽 合肥230032 安徽安科生物工程(集团)股份有限公司;

  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类 口腔病理学;
  • 关键词

    牙龈卟啉单胞菌; 免疫球蛋白Y; 卵黄抗体;

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