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西达本胺联合姜黄素对人皮肤T细胞淋巴瘤细胞系Hut78的影响及其分子机制

         
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目的研究西达本胺联合姜黄素对皮肤T细胞淋巴瘤（CTCL）细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用, 探讨西达本胺联合姜黄素治疗CTCL的机制。方法分别用0.3、0.6、1.2、2.4 μmol/L西达本胺, 10 μmol/L姜黄素, 1.2 μmol/L西达本胺联合10 μmol/L姜黄素处理Hut78细胞24、48、72 h后, 采用MTS法检测Hut78细胞的生存率。用0.6、1.2 μmol/L西达本胺, 10 μmol/L姜黄素, 1.2 μmol/L西达本胺联合10 μmol/L姜黄素分别处理Hut78细胞24 h, 用流式细胞仪检测细胞凋亡情况及细胞周期, 用实时PCR和Western印迹法检测凋亡相关基因Fas、caspase 8、NF-κB p65及细胞周期相关基因P21、CDK2、细胞周期蛋白E（cyclin E）mRNA和蛋白的表达。统计分析采用重复测量方差分析、单因素方差分析和LSD-t检验。结果西达本胺能明显抑制Hut78细胞的增殖, 且呈剂量依赖性（F = 266.558, P ＆ 0.001）和时间依赖性（F = 564.966, P ＆ 0.001）。培养48 h和72 h时, 1.2 μmol/L西达本胺联合10 μmol/L姜黄素对细胞增殖的抑制作用显著强于1.2 μmol/L西达本胺及10 μmol/L姜黄素（均P ＆ 0.001）。流式细胞仪结果显示, 联合组的凋亡细胞比例均显著高于0.6、1.2 μmol/L西达本胺组和10 μmol/L姜黄素组（均P ＆ 0.001）。此外, 联合组和1.2 μmol/L西达本胺组G0/G1期细胞比例明显高于0.6 μmol/L西达本胺组和10 μmol/L姜黄素组, 而其S期细胞比例及G2/M期细胞比例均明显低于0.6 μmol/L西达本胺组和10 μmol/L姜黄素组（均P ＆ 0.05）, 联合组与1.2 μmol/L西达本胺组各细胞周期比例差异均无统计学意义（均P ＆ 0.05）。实时PCR结果显示, 联合组和1.2 μmol/L西达本胺组Fas、caspase 8、P21 mRNA的表达均明显高于0.6 μmol/L西达本胺组和10 μmol/L姜黄素组（均P ＆ 0.001）, 而其NF-κB p65、CDK2、cyclin E mRNA的表达均明显低于0.6 μmol/L西达本胺组和10 μmol/L姜黄素组（均P ＆ 0.001）。联合组Fas mRNA的表达明显高于1.2 μmol/L西达本胺组（P ＆ 0.001）, 而caspase 8、P21、NF-κB p65、CDK2、cyclin E mRNA的表达与1.2 μmol/L西达本胺组差异无统计学意义（均P ＆ 0.05）。Western印迹结果显示, 联合组与0.6、1.2 μmol/L西达本胺、不加药物的对照组比较, Fas、caspase 8、P21蛋白的表达明显增加, 而NF-κB p65、CDK2、CyclinE蛋白的表达明显降低, 与以上基因mRNA的表达一致。结论西达本胺通过抑制细胞增殖和促进细胞凋亡来抑制CTCL细胞系Hut78生长, 联合姜黄素能明显提高抑制CTCL细胞系Hut78的生长率。

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