RNA干扰技术对犬小孢子菌PQ-LRP基因沉默的研究

陈昕宜; 杨国玲; 刘建雯; 刘金鹏; 张芳芳; 赵晓宣

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RNA干扰技术对犬小孢子菌PQ-LRP基因沉默的研究

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目的构建犬小孢子菌PQ-LRP基因RNA干扰载体,探讨RNA干扰载体对犬小孢子菌PQLRP基因表达的影响。方法用根癌农杆菌介导的T-DNA插入突变技术,加入多克隆位点,引入潮霉素抗性基因,先后构建PUC-PLULT、PCB309-PLULT载体。应用实时PCR方法检测PCB309-PLULT载体对犬小孢子菌PQ-LRP基因表达的干扰作用。结果构建了中间载体PUC-PLUT、PUC-PLULT,并通过PCR、基因测序进行鉴定。成功构建了长为8 825 bp的干扰载体PCB309-PLULT,并通过酶切测定为该目的载体;筛选出犬小孢子菌转化子的潮霉素最佳浓度为300 mg/L;用实时定量PCR方法对犬小孢子菌P0-LRP基因干扰前后表达量进行鉴定:以干扰前PQ-LRP相对表达量1.0为标准,干扰后PQ-LRP相对表达量为0.39,干扰后下调61%。结论干扰载体PCB309-PLULT可以明显抑制犬小孢子菌PQ-LRP基因的表达。

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来源
《中华皮肤科杂志》 |2014年第8期||共页
作者
陈昕宜; 杨国玲; 刘建雯; 刘金鹏; 张芳芳; 赵晓宣;
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作者单位

大连医科大学附属第一医院皮肤性病科;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类真菌性皮肤病;
关键词
犬小孢子菌; RNA干扰; 基因; PQ-LRP; 基因沉默;

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