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壳聚糖膜与兔角膜内皮细胞生物相容性的研究

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摘要

背景 目前对角膜内皮移植载体的研究较多,但究竟何种载体更适合作为角膜内皮移植载体并无明确定论. 目的 观察壳聚糖的细胞相容性及组织相容性,探讨该材料作为角膜内皮移植载体的可能性.方法 10只新西兰白兔用过量麻醉法处死后摘取新鲜眼球,用组织块培养法培养角膜内皮细胞（CECs）,将壳聚糖膜片置于无菌48孔板中,每孔加入200 μl细胞悬液进行孵育,观察细胞的形态和密度.采用扫描和透射电子显微镜观察细胞表面和超微形态结构.用免疫荧光法检测壳聚糖膜片上培养的CECs中纤维连接蛋白（FN）、Ⅰ型胶原（Coll-Ⅰ）、连接黏附分子-1（ZO-1）的表达.健康新西兰白兔10只,左眼经前房植入壳聚糖膜片,右眼仅做前房穿刺作为对照组,术后裂隙灯显微镜下观察术眼眼前节炎症反应及角膜水肿情况.于术后1、4、8周分别测量术眼角膜厚度,术后2周用角膜内皮镜观察兔眼的CECs形态,测定CECs密度,术后1个月、3个月时摘除兔眼眼球,角膜组织行苏木精-伊红染色,观察角膜炎症反应情况.采用配对t检验对实验组和对照组间各测量指标的数据资料进行统计学分析. 结果 CECs在壳聚糖膜片孵育5d后形成完整的单层多角形细胞,形态规则,7d后达到90％融合,细胞40％呈六角形,细胞间连接紧密.扫描电子显微镜下可见兔CECs为近圆形或多边形,以桥粒紧密连接,细胞表面有微绒毛；透射电子显微镜下可见细胞膜表面的突起、伪足和微绒毛,细胞质内可见空泡和其上有核糖核蛋白体的扩张内质网,染色质丰富.免疫荧光检测显示,壳聚糖膜片上培养的CECs中FN、Coll-Ⅰ、ZO-1呈阳性表达.兔活体前房内植入含CECs的壳聚糖膜片后3d,裂隙灯显微镜下可见前房内渗出物和角膜水肿；术后14d左右,前房内渗出完全吸收,角膜恢复透明.术后1、4、8周,实验组与对照组间角膜厚度的差异均无统计学意义（t=1.377,P=0.265；t=1.795,P=0.165；t=0.390,P=0.760）；两组间CECs密度和六角形细胞率的差异均无统计学意义（P=0.365、0.062）；术后3个月时实验兔角膜组织病理学检查发现,壳聚糖膜片周围炎性细胞浸润消失,角膜内皮结构良好.结论壳聚糖载体膜片与体外培养的兔CECs生物相容性好,是CECs移植的潜在良好载体.

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