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首页> 中文期刊> 《中华肝脏病杂志》 >脱氧核酶对丙型肝炎病毒RNA的剪切活性

脱氧核酶对丙型肝炎病毒RNA的剪切活性

         
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目的 观察丙型肝炎病毒（HCV）RNA特异性脱氧核酶的体外剪切活性,探讨其用于抗病毒基因调控的可能性。 方法 以HCV 5’-非编码区及部分C区（5’-NCR-C）中两个具有5’…A ↓ U…3’特征的序列为靶位,以5’GGCTAGCTACAACGA3‘为活性中心,设计并合成两端经硫代修饰的脱氧核酶（TDRz）,即TDRz-127和TDRz1。用Nar 1将质粒pHCV-neo完全线性化后,以之为模板体外转录获取HCV 5’-NCR-C;用碱性磷酸酶去除其5’端磷酸,再用T4聚核苷酸激酶和γ-32P-ATP进行5’端放射陛标记。在pH7.5、Mg2+10 mmol/L等条件下,将两种TDRz分别（5μmol/L）或共同（各2.5μmol/L）与底物RNA（200 nmol/L）混合,经变性、复性后于37℃孵育,分别于不同的时间点取出等份终止反应。以8％变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和放射自显影分离、显示剪切产物,在凝胶成像分析仪上分析各条带光密度值并计算剪切百分率。 结果 在所设常用反应条件下于37℃孵育15、30、45、60、75、90min后,TDRz-127的剪切百分率分别达8.3％、16.1％、24.3％、26.2％、29.4％和31.1％,TDRzl的剪切百分率分别达7.4％,13.0％、15.6％、18.7％、19.4％和20.3％,两者同时剪切时的百分率约15.1％、29.6％、37.8％、39.1％、41.5％、42.6％。结论 TDRz-127和TDRzl对HCV 5’-NCR-C的剪切百分率随时

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