乙型肝炎病毒X蛋白通过诱导P3启动子低甲基化促进胰岛素样生长因子-Ⅱ基因表达

汤绍辉; 张少华; 张小娟; 吴胜兰; 李俊峰; 江向武; 周鸿科; 罗羽宏; 曹明溶

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目的探讨乙型肝炎病毒X蛋白（HBx）对胰岛素样生长因子-Ⅱ（IGF-Ⅱ）基因P3启动子驱动的mRNA表达的影响及其表观遗传机制。方法分别采用定量RT-PCR和亚硫酸氢盐测序法检测HBV感染阳性和阴性肝癌组织中P3 mRNA、HBx mRNA表达水平及P3启动子甲基化状态;进一步分析稳定表达HBx蛋白的肝癌细胞株HepG2-HBx及其对照细胞株HepG2-control中P3 mRNA表达水平及P3启动子甲基化状态;最后,将体外甲基化的IGF-Ⅱ基因P3启动子驱动的荧光素酶报告载体pGL3-P3及携带HBx基因的pCMV-tag2B-X质粒共转染HepG2细胞,采用亚硫酸氢盐测序法及双萤光素酶试验检测HBx蛋白对P3启动子转录活性和甲基化状态的影响。计数资料采用x~2或Fisher精确检验,计量资料采用独立样本t检验或Mann--Whitney U检验,线性相关分析采用Pearson相关系数评价。结果（1）HBV感染阳性的肝癌组织中P3 mRNA表达水平（△CT为-9.59士3.22）明显高于HBV阴性的肝癌组织（△CT为-12.97±3.08）,P=0.006;而P3启动子17个CpG位点的平均甲基化水平（36.9%±15.5%）明显低于HBV阴性的肝癌组织（52.1%±19.1%）,P=0.025;P3 mRNA丰度与HBx mRNA表达水平呈正相关,而与P3启动子甲基化水平呈负相关。（2）在HepG2-HBx及其对照细胞中,也显示了类似的P3 mRNA表达水平及P3启动子甲基化水平变化。（3）体外转染的HBx蛋白显著降低了P3启动子甲基化水平,提高了其转录活性。结论 HBx蛋白可能通过降低P3启动子甲基化水平促进肝细胞癌IGF-Ⅱ基因表达,本结果为充分理解HBx蛋白介导的肝细胞癌发病机制提供了新的信息。

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来源
《中华肝脏病杂志》 |2014年第4期||共页
作者
汤绍辉; 张少华; 张小娟; 吴胜兰; 李俊峰; 江向武; 周鸿科; 罗羽宏; 曹明溶;
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作者单位

暨南大学附属第一医院消化科;

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正文语种 chi
中图分类 R512.62;
关键词
癌; 肝细胞; X蛋白; 肝炎病毒; 乙型; 胰岛素样生长因子Ⅱ; 启动子; 低甲基化;

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