茎环结构的逆转录实时定量PCR对Huh7细胞microRNAs的检测

龚邦东; 谢青; 王琳; 项晓刚; 林兰意; 赵钢德; 王晖; 俞红

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茎环结构的逆转录实时定量PCR对Huh7细胞microRNAs的检测

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目的建立一种简便检测人肝癌细胞株Huh7细胞microRNAs的实时定量PCR方法,并探讨其敏感性和特异性。方法提取Huh7细胞总RNA,通过microRNA芯片检测出3个分别代表高、中、低拷贝的microRNA 122、24、146a,并用Northern blot证实。然后分别采用poly（A）加尾和茎环结构的逆转录实时定量PCR方法检测上述3个microRNAs。用Quantity One软件和7500系统软件进行分析。结果Huh7细胞芯片microRNA 122、24、146a的信号强度分别为2201.49、410.20、4.70,Northern blot证实相对表达量分别为0.0383、0.0249、0.0001。poly （A）加尾逆转录实时定量PCR方法只能检测出microRNA 122,而茎环结构的逆转录实时定量PCR方法对microRNA 122、24、146a均能检测出,其相对于U6平均dCt值分别为2.5、5.8、12.1,与MicroRNA芯片和Northern blot结果一致。结论应用茎环结构的逆转录实时定量PCR方法能够特异、敏感地检测出Huh7细胞高、中、低拷贝的microRNAs。

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来源
《中华肝脏病杂志》 |2009年第8期||共页
作者
龚邦东; 谢青; 王琳; 项晓刚; 林兰意; 赵钢德; 王晖; 俞红;
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作者单位

上海交通大学医学院附属瑞金医院感染科;

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正文语种 chi
中图分类肝肿瘤;
关键词
癌; 肝细胞; 逆转录聚合酶链反应; MicroRNA;

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