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应用shRNA研究乙型肝炎病毒X基因表达和三氧化二砷对HepG2细胞p53表达和活性的影响

         

摘要

目的应用短发夹状RNA介导的RNA干扰研究乙型肝炎病毒X基凶(HBX)和三氧化二砷(As2O3)对HepG2细胞p53表达和活性的影响。方法以2μmol/L As2O3处理HepG2细胞和表达HBX的HepG2-X,以未处理细胞为对照,提取细胞裂解物或胞核袋解物,采用改进的酶联免疫吸附法检测p53总量和相对活性吸光度。应用脂质体介导具钉HBX序列特异性短发央状RNA表达载体Xi S1、Xi-S2和序列无关对照Xi-S3转染HepG2 X,再次观察As2O3处理对p53表达和活性的影响。结果As2O03作用使HepG2和HepG2 X细胞p53蛋白水平上调和p53相对活性比增强。表达HBX后As2O3秀导的p53蛋白水平有所上调,但显著抑制p53相对活性。短发夹状RNA抑制HBX的表达后其对p53的活性抑制得以解除。结论As2O3使HepG2细胞p53表达上调和活性增强。应用短发夹状RNA介导的RNA干扰有利于研究HBX的表达对p53表达和活性的影响。HBX表达上调As2O3诱导的p53蛋白水平,但显著抑制p53的结合与转录调节活性。

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