U6嵌和型Maxizyme对肝癌突变抑癌基因p53的抑制作用

孔心涓; 林菊生; 宋宇虎; 金由辛

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目的探讨U6嵌和型Maxizyme对肝癌突变抑癌基因p53的抑制作用.方法应用计算机设计针对肝癌突变抑癌基因p53(mtp53)249位密码子(AGG→AGT)Maxizyme(Mz)的基因片段,构建其真核表达载体,使抗mtp53的Mz嵌于U6表达系统中,细胞外由T7 RNA聚合酶转录,细胞内由RNA聚合酶Ⅲ高效转录.检测Mz在细胞外对mtp53的切割效率.在LipofectamineTM2000介导下转染肝癌细胞MHCC97,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Mz对肝癌细胞mtp53的抑制作用,western blot分析mtp53蛋白表达水平,并用四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察肿瘤细胞的生长情况.结果在细胞外,Mz可特异性切割靶基因mtp53,切割效率为42%,而野生型p53(wtp53)没有被切割.RT-PCR和western blot检测结果提示转染Mz的MHCC97内mtp53 mRNA和蛋白(5.3×104)表达均明显下降,转染Mz的MHCC97增殖速度明显降低.结论 U6表达系统能高效启动核酶等小分子RNA的转录,U6嵌和型Maxizyme在细胞内外均可特异性抑制mtp53表达,抑制肝癌细胞增殖,有望开发为肝癌基因治疗的新方法.

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来源
《中华肝脏病杂志》 |2005年第10期|759-762|共4页
作者
孔心涓; 林菊生; 宋宇虎; 金由辛;
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作者单位

430030,武汉,华中科技大学同济医学院附属同济医院肝病研究所;

430030,武汉,华中科技大学同济医学院附属同济医院肝病研究所;

430030,武汉,华中科技大学同济医学院附属同济医院肝病研究所;

中国科学院上海生物化学与细胞生物学研究所;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类肿瘤学;
关键词
癌,肝细胞; 基因,p53; 基因疗法; Maxizyme;

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