P53凋亡刺激蛋白2过表达对转化生长因子β1诱导的肝星状细胞活化、凋亡的影响及其机制

林明华; 郭向华; 乔录新; 谢放; 石英

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目的研究P53凋亡刺激蛋白2（ASPP2）对转化生长因子β1（TGF-β1）诱导的肝星状细胞活化及凋亡的影响, 并探讨自噬在该过程中的作用。方法小鼠原代分离培养的肝星状细胞（mHSC）, 采用转染试剂盒分别转染表达绿色荧光蛋白（GFP）的载体空病毒Ad-GFP及表达ASPP2的腺病毒Ad-ASPP2, 12 h;再分别加TGF-β1（10 ng/ml）作用24 h。实验分组:对照组:转染表达GFP的载体空病毒Ad-GFP;实验一组:转染Ad-GFP并加入TGF-β1诱导;实验二组:转染Ad-ASPP2并加入TGF-β1诱导。采用蛋白质印迹法和实时荧光定量PCR检测ASPP2、α-平滑肌肌动蛋白（SMA）的表达情况, 同时用微管相关蛋白1轻链3-β（LC3）测定细胞自噬情况。用免疫细胞化学法及RNA干扰（RNAi）技术观察mHSC的自噬、凋亡情况。多组样本均数的两两比较采用单因素方差分析。结果 TGF-β1+Ad-GFP组mHSC的α-SMA mRNA相对表达量（16.83±2.41）较Ad-GFP组（3.62±0.56）明显增加（P ＆ 0.05）;而TGF-β1+Ad-ASPP2组mHSC的α-SMA mRNA相对表达量（4.22±0.48）较TGF-β1+Ad-GFP组显著降低（P ＆ 0.05）;上述各组α-SMA蛋白表达情况与mRNA表达一致。TGF-β1+Ad-GFP组mHSC自噬比例（80%）较Ad-GFP组（35%）明显增高;而两组凋亡率差异无统计学意义。TGF-β1+Ad-ASPP2组mHSC自噬比例为42%, 较TGF-β1+Ad-GFP组明显减少, 但凋亡率显著增加。细胞同时给予自噬抑制剂3-MA和TGF-β1处理, 其细胞自噬水平与TGF-β1+Ad-ASPP2组比较, 差异无统计学意义, 但凋亡率增加。另外, 加入ASPP2的RNAi组与对照RNAi组相比, 自噬（LC3-Ⅱ/LC3-I）有所增加, 凋亡率明显减少。结论 ASPP2过表达可以减轻mHSC的活化, 并通过抑制肝星状细胞自噬促进其凋亡, 进而减轻肝纤维化。

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来源
《中华肝脏病杂志》 |2019年第11期||共页
作者
林明华; 郭向华; 乔录新; 谢放; 石英;
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作者单位

首都医科大学附属北京佑安医院北京市肝病研究所;

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正文语种 chi
中图分类肝硬变;
关键词
细胞凋亡; 自噬; 肝星状细胞; P53凋亡刺激蛋白2;

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