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Cyr 61基因过表达对人肾小管上皮细胞凋亡的影响

         

摘要

目的:观察Cyr61基因过表达对人肾小管上皮细胞(HKC)凋亡的影响,探讨Cyr61在常染色体显性多囊肾病(ADPKD)发病中的作用及机制.方法:RT-PCR扩增Cyr61基因全长,构建pcDNA3.1+Cyr61重组质粒,转染并筛选获得稳定转染pcDNA3.1+Cyr61的HKC细胞.经RT-PCR、Northern、Western blot鉴定转染细胞系基因的整合及表达.对空白HKC、空质粒pcDNA3.1转染的HKC、Cyr61转染的HKC和囊肿衬里上皮细胞去血清培养72 h后,流式细胞仪检测细胞凋亡指数,Western blot检测磷酸化Akt和Bad含量.结果:构建了pcDNA3.1+Cyr61重组质粒并获得稳定转染该质粒的HKC细胞.空白HKC与质粒pcDNA3.1转染组之间上述指标无显著差异(P>0.05),Cyr61基因转染组与空白组、pcDNA3.1转染组相比,凋亡指数显著降低(P<0.01),磷酸化Akt和磷酸化Bad含量显著增高(P<0.01),Cyr61基因转染组与囊肿衬里上皮细胞之间上述指标无显著差异(P>0.05);在Cyr61抗体存在下,Cyr61基因转染组的上述指标与空白组无显著差异(P>0.05).结论:过表达Cyr61的HKC对去血清诱导的凋亡特性与囊肿衬里上皮细胞相似,过表达的Cyr61可能通过自分泌途径,促进Akt和Bad磷酸化,抑制细胞凋亡,参与ADPKD囊肿形成和发展.

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