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人AWP1-RFP融合基因重组腺病毒的快速构建及其鉴定

摘要

目的构建人的AWP1与红色荧光蛋白(RFP)融合基因的重组腺病毒载体,为研究AWP1的生物功能提供工具. 方法将克隆的AWP1 cDNA插入高效表达RFP的载体pDsRed1N1的多克隆位点,与RFP序列形成AWP1-RFP融合基因,将该融合基因亚克隆到穿梭载体pAdTrack-CMV和pAdShuttle-CMV中;经酶切鉴定正确后Pme Ⅰ线形化,与骨架质粒pAdEasy-1共转染大肠杆菌BJ5183以同源重组;用lipofectAMINE将Pac Ⅰ线形化的同源重组腺病毒载体转染293细胞以包装腺病毒;通过同源重组病毒载体和病毒颗粒基因组的DNA测序及PCR扩增和在293细胞中的表达鉴定重组腺病毒.结果同源重组载体和病毒颗粒的DNA测序和PCR分析显示AWP1cDNA序列正确,感染293细胞获得了AWP1-RFP融合蛋白的高效表达.结论成功构建和包装了人AWP1-RFP融合基因重组腺病毒.

著录项

  • 来源
    《中华神经医学杂志》 |2005年第5期|434-438|共5页
  • 作者单位

    510515,广州,南方医科大学病理生理学教研室,广东省功能蛋白质组学重点实验室;

    610083,成都军区总医院全军普外中心;

    510515,广州,南方医科大学病理生理学教研室,广东省功能蛋白质组学重点实验室;

    610083,成都军区总医院全军普外中心;

    510515,广州,南方医科大学病理生理学教研室,广东省功能蛋白质组学重点实验室;

    510515,广州,南方医科大学病理生理学教研室,广东省功能蛋白质组学重点实验室;

    510515,广州,南方医科大学病理生理学教研室,广东省功能蛋白质组学重点实验室;

    510515,广州,南方医科大学病理生理学教研室,广东省功能蛋白质组学重点实验室;

    510515,广州,南方医科大学病理生理学教研室,广东省功能蛋白质组学重点实验室;

  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类 有机毒物;
  • 关键词

    AWP1; 红色荧光蛋白; 重组腺病毒; 绿色荧光蛋白;

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