miR-23 a-27 a表达载体构建及功能初探

马怡晖; 于双妮; 卢朝辉; 陈杰

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miR-23 a-27 a表达载体构建及功能初探

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目的构建miR-23a-27a簇真核表达载体并初步探讨该簇的靶基因及其功能。方法应用分子克隆的方法构建联合表达pre-miR-23a-27a簇及单独表达pre-miR-23a、pre-miR-27a的真核载体,应用双荧光素酶报告基因试验和real-time PCR验证该载体表达的有效性,应用mieroRNA靶基因预测软件和双荧光素酶报告基因试验寻找及鉴定pre-miR-23a-27a的靶基因,应用Western blot和real-time PCR的方法在乳腺癌细胞MCF-7中初步探讨miR-27a的功能。结果（1）pre-miR-23a-27a-peDNA3.1、pre-miR-23a-pcDNA3.1、pre-miR-27a-pcDNA3.1重组质粒能够在真核细胞HEK293T中有效转录加工出相应的miR-23a和miR-27a;（2）miR-23a和miR-27a能够同连有Sprouty2基因MRE序列的pRL-TK重组质粒作用,但是只有miR-27a能够同连有Sprouty2基因3’-非翻译区（UTR）全长序列的pRL-TK重组质粒作用,而将Sprouty2基因3’-UTR中同miR-27a结合位点定点突变后,miR-27a无法同其作用;（3）在人乳腺癌细胞MCF-7中转染pre-miR-27a-peDNA3.1真核表达载体,能够在蛋白水平显著影响Sprouty2基因的表达,但是对其RNA水平没有显著影响。结论 Sprouty2可能是miR-27a的功能靶基因,pre-miR-23a-27a-peDNA3.1、pre-miR-23a-peDNA3.1、pre-miR-27a-pcDNA3.1载体的构建为下一步深入研究miR-23a和miR-27a的功能奠定了基础。

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来源
《中华病理学杂志》 |2012年第7期||共页
作者
马怡晖; 于双妮; 卢朝辉; 陈杰;
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作者单位

1. 中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院病理科 2. 河南郑州大学第一附属医院病理科 3. 中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院病理科;

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正文语种 chi
中图分类基因工程（遗传工程）;
关键词
微RNAs; 靶基因修复; 遗传载体; 细胞系; 肿瘤;

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