血管生长素-1基因慢病毒载体的构建及其在间质干细胞的表达

陈柏龄; 张志坚; 黄东煜; 吴秀丽; 张彦定

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目的:构建带有血管生长素-1(Ang-1)基因的慢病毒载体并实现该基因在大鼠骨髓间质干细胞(rMSCs)中的表达.方法:RT-PCR获得大鼠Ang-1基因,限制性内切酶酶切和基因重组构建慢病毒载体质粒PNL-Ang-1-IRES2-EGFP,在脂质体介导下与包装质粒HELPER,包膜质粒VSVG共转染293T细胞包装生产慢病毒颗粒并感染rMSCs.PCR检测Ang-1基因的插入,细胞RT-PCR检测Ang-1 mRNA表达,免疫细胞化学和Western blotting检测Ang-1蛋白的表达.结果:所获Ang-1基因经测序证实与GenBank报道的序列一致.慢病毒载体质粒PNL-Ang-1-IRES2-EGFP经SalⅠ和BamHⅠ双酶切后电泳显示1 512 bp Ang-1目的基因片段和10.5 kb PNL-IRES2-EGFP载体片段.病毒基因组PCR证实Ang-1基因插入.荧光显微镜观察到EGFP表达.细胞RT-PCR检测到Ang-1 mRNA表达.免疫细胞化学和Western blotting检测到Ang-1蛋白表达.结论:成功构建带有Ang-1基因的慢病毒载体并实现在rMSCs中的表达,为Ang-1基因修饰干细胞的应用研究奠定了基础.

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来源
《中国病理生理杂志》 |2007年第8期|1618-1622|共5页
作者
陈柏龄; 张志坚; 黄东煜; 吴秀丽; 张彦定;
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作者单位

福建医科大学第一临床学院,福建,福州,350002;

福建省神经病学研究所,福建医科大学附属第一医院,福建,福州,350002;

福建医科大学第一临床学院,福建,福州,350002;

福建省神经病学研究所,福建医科大学附属第一医院,福建,福州,350002;

福建医科大学第一临床学院,福建,福州,350002;

福建省神经病学研究所,福建医科大学附属第一医院,福建,福州,350002;

福建省神经病学研究所,福建医科大学附属第一医院,福建,福州,350002;

福建师范大学生物工程学院,福建,福州,350007;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类病理生理学;
关键词
间质干细胞; 基因,Ang-1;

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