真核表达载体pLNCX/anti-CD20scFv/IgGFc/CD80/CD28/ζ的构建及其在NIH 3T3细胞株中的表达

胡永仙; 俞康; 谭映霞; 吴建波; 沈志坚; 钱红兰; 梁彬; 单大铭

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真核表达载体pLNCX/anti-CD20scFv/IgGFc/CD80/CD28/ζ的构建及其在NIH 3T3细胞株中的表达

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目的:构建pLNCX/anti-CD20scFv/IgGFc/CD80/CD28/ζ的重组真核表达载体,并在NIH 3T3细胞株中表达.方法:采用DNA重组技术把pBULLET上的CD28-ζcDNA插入到已含anti-CD20 scFv/IgGFc/CD80的真核表达载体pLNCX质粒上,转染NIH 3T3细胞株,经G418筛选细胞,用RT-PCR、流式细胞术检测目的基因表达情况.结果:经菌落PCR、酶切及一次测序鉴定均证实pLNCX/anti-CD20scFv/IgGFc/CD80/CD28/ζ的成功构建;经RT-PCR法,能够从转染的NIH 3T3细胞中扩增出1条与目的基因大小一致的DNA片段,流式细胞术检测显示该目的基因能够在NIH 3T3细胞中表达目的蛋白.结论:重组表达载体pLNCX/anti-CD20scFv/IgGFc/CD80/CD28/ζ的构建,并在NIH 3T3细胞株中的成功表达,为该重组质粒转染原代T淋巴细胞从而制备CD20靶向性嵌合锚定T细胞奠定了基础.

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来源
《中国病理生理杂志》 |2007年第9期|1832-1836|共5页
作者
胡永仙; 俞康; 谭映霞; 吴建波; 沈志坚; 钱红兰; 梁彬; 单大铭;
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作者单位

温州医学院附属第一医院血液内科,浙江,温州,325000;

温州医学院附属第一医院血液内科,浙江,温州,325000;

温州医学院附属第一医院医学科学研究所,浙江,温州,325000;

温州医学院附属第一医院医学科学研究所,浙江,温州,325000;

温州医学院附属第一医院血液内科,浙江,温州,325000;

温州医学院附属第一医院血液内科,浙江,温州,325000;

温州医学院附属第一医院血液内科,浙江,温州,325000;

Bio-Rad公司临床实验室,加利福尼亚州,美国;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类病理生理学;
关键词
抗体; 肿瘤; 基因疗法; 基因表达; NIH 3T3细胞;

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