一种生物膜表面唾液酸的染色和定量方法

张柏惠; 杨晓倩; 邹翔; 曲中原; 崔琳琳; 郭守东

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一种生物膜表面唾液酸的染色和定量方法

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目的:建立一种细胞、组织和器官生物膜表面唾液酸的染色及定量方法.方法:设计平行实验,确定最佳染色条件.将接种在盖玻片上的细胞用PBS洗涤后,加高碘酸钠(NaIO4,1 mmol/L)于4°C轻度选择性氧化生物膜表面的唾液酸在C-7位成醛;随后,加入甘油工作液终止氧化,再用冷的PBS清洗;再加入荧光素-5-氨基硫脲(FTSC,100μmol/L)荧光染料与生成的醛基避光反应,并采用PBS洗涤;最后,采用DAPI染核并采用PBS-T清洗,甘油封片、拍照,采用图像处理软件量化分析.组织切片经多聚甲醛固定后,按照上述优化后的步骤染色.结果:平行实验结果显示,FTSC染色40 min细胞表面唾液酸的成像效果最佳;3种不同的细胞经唾液酸染色后均呈现强的绿色荧光,经100μmol/L H2O2处理24 h后,荧光强度显著降低(P<0.01);该方法可原位检测小鼠组织切片和动脉内壁的唾液酸水平.假阳性结果可通过纳入仅采用FTSC处理组排除或扣除背景.结论:该方法可对不同细胞、组织和器官表面的唾液酸进行原位染色及定量分析.

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来源
《中国病理生理杂志》 |2021年第7期|1329-1337|共9页
作者
张柏惠; 杨晓倩; 邹翔; 曲中原; 崔琳琳; 郭守东;
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作者单位

哈尔滨商业大学药学院(药物工程技术研究中心) 黑龙江哈尔滨150076;

潍坊医学院药学院脂代谢与动脉粥样硬化研究室山东潍坊261053;

哈尔滨商业大学药学院(药物工程技术研究中心) 黑龙江哈尔滨150076;

潍坊医学院药学院脂代谢与动脉粥样硬化研究室山东潍坊261053;

哈尔滨商业大学药学院(药物工程技术研究中心) 黑龙江哈尔滨150076;

哈尔滨商业大学药学院(药物工程技术研究中心) 黑龙江哈尔滨150076;

哈尔滨商业大学药学院(药物工程技术研究中心) 黑龙江哈尔滨150076;

哈尔滨商业大学药学院(药物工程技术研究中心) 黑龙江哈尔滨150076;

潍坊医学院药学院脂代谢与动脉粥样硬化研究室山东潍坊261053;

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正文语种 chi
中图分类药理的实验方法与技术;病理生理学;
关键词
唾液酸; 荧光标记; 动脉粥样硬化; 斑块着色; 氧化应激;

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