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HEK293细胞中细丝蛋白-C对α1A-肾上腺素受体介导细胞外信号调节激酶磷酸化作用的影响

         

摘要

目的寻找与α1A-肾上腺素受体(α1A-AR)相互作用的胞浆内非G蛋白,研究蛋白对受体信号转导的影响.方法应用酵母双杂交技术,以人α1A-AR胞浆内C末端(α1A-AR-CT)为诱饵,筛选人脑cDNA文库,用5-溴-4-氯-3-吲哚半乳糖苷(X-Gal)定性分析及邻硝基苯基β-D-半乳糖苷(ONPG)定量分析对筛选出的阳性克隆细丝蛋白-C(FLN C)进行确证.采用脂质体转染及蛋白免疫印迹技术探讨人胚胎肾293(HEK293)细胞中FLN C对α1A-AR信号转导通路的影响.结果①缺陷培养基筛选出FLN C的C末端部分片段可以与α1A-AR-CT在酵母中结合.②X-Gal定性分析中,FLN C与α1A-AR-CT的共转子菌落6 h即呈现蓝色,而对照菌落颜色无变化;经ONPG定量分析发现,FLN C与α1A-AR-CT的共转子中β-半乳糖苷酶的活性大约是对照的2~3倍(P<0.01).③编码FLN C的C末端片段的质粒瞬时转染于稳定表达全长α1A-AR的HEK293细胞中,可以明显增强去氧肾上腺素(10 μmol*L-1,30 min)激动α1A-AR介导的细胞外信号调节激酶(ERK1/2)磷酸化作用.结论 FLN C的C末端部分片段可以与α1A-AR-CT在酵母中结合,并且增强HEK293细胞中α1A-AR介导ERK1/2磷酸化的作用.

著录项

  • 来源
    《中国药理学与毒理学杂志》 |2004年第3期|178-183|共6页
  • 作者单位

    北京大学第三医院血管医学研究所;

    分子心血管学教育部重点实验室;

    北京;

    100083;

    北京大学第三医院血管医学研究所;

    分子心血管学教育部重点实验室;

    北京;

    100083;

    北京大学第三医院血管医学研究所;

    分子心血管学教育部重点实验室;

    北京;

    100083;

    北京大学第三医院血管医学研究所;

    分子心血管学教育部重点实验室;

    北京;

    100083;

    北京大学第三医院血管医学研究所;

    分子心血管学教育部重点实验室;

    北京;

    100083;

    北京大学第三医院血管医学研究所;

    分子心血管学教育部重点实验室;

    北京;

    100083;

    北京大学第三医院血管医学研究所;

    分子心血管学教育部重点实验室;

    北京;

    100083;

  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类 化学药理学;
  • 关键词

    酵母菌; 杂交; 受体; 肾上腺素α1; 细丝蛋白;

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