基于WIPI1蛋白自噬检测方法及其在PCV2感染细胞自噬研究中的应用

谷元兴; 周莹珊; 齐宝珠; 蒋小武; 李肖梁; 方维焕

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多种病毒感染能够诱导细胞自噬,WIPI1蛋白是一种新发现的细胞自噬标记分子.为在PK-15细胞中建立基于红色荧光蛋白(DsRed)与WIPI1融合表达蛋白的自噬检测方法,本研究以猪圆环病毒2型(PCV2)感染为模式病毒,以药物处理作为阳性对照验证该方法的适用性.采用亚克隆策略构建了表达猪源WIPI1与DsRed融合蛋白的真核重组表达质粒pRed-WIPI1,western blot检测显示DsRed-WIPI1融合蛋白能够在PK-15细胞内表达,但不激活自噬标志分子LC3-Ⅱ形成.然而,激光共聚焦分析显示,PCV2感染或自噬诱导剂Thapsigargin (Tg)及饥饿处理均能够显著促进WIPI1在细胞内形成点状聚集,并且促进DsRed-WIPI1与EGFP-LC3的共定位.此外,荧光定量PCR结果显示,PCV2感染或Tg处理均能够显著上调wipi1的mRNA水平.本研究在稳定表达EGFP-LC3的PK-15细胞中建立了基于WIPI1蛋白的细胞自噬检测方法,该方法可以用于深入探索相关病毒感染诱导细胞自噬及其机制.

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来源
《中国预防兽医学报》 |2016年第7期|537-541566|共6页
作者
谷元兴; 周莹珊; 齐宝珠; 蒋小武; 李肖梁; 方维焕;
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作者单位

浙江大学预防动物医学研究所/浙江省动物预防医学重点实验室,浙江杭州310058;

浙江大学预防动物医学研究所/浙江省动物预防医学重点实验室,浙江杭州310058;

浙江大学预防动物医学研究所/浙江省动物预防医学重点实验室,浙江杭州310058;

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浙江大学预防动物医学研究所/浙江省动物预防医学重点实验室,浙江杭州310058;

浙江大学预防动物医学研究所/浙江省动物预防医学重点实验室,浙江杭州310058;

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正文语种 chi
中图分类家畜病毒学;
关键词
WIPI1; 自噬标记; 猪圆环病毒2型;

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