香鱼假单胞菌SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立

周涛; 张继挺; 王国良

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香鱼假单胞菌SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立

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为建立香鱼假单胞菌的快速定量检测方法,本研究根据GenBank中登录的rpoD基因序列设计了一对特异性引物,以该菌基因组DNA为模板通过PCR扩增其180 bp的ropD基因片段,并克隆于pMD18-T载体中,以纯化的重组质粒为标准品建立了香鱼假单胞菌SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法.结果显示在1.9×103拷贝/μL～1.9× 1o8拷贝/μL范围内呈现良好的线性关系,相关系数为0.999,灵敏度可达1.9×103拷贝/μL;该方法对恶臭假单胞菌、荧光假单胞菌、创伤弧菌等病原菌DNA扩增结果均为阴性,特异性良好;组内和组间变异系数均小于2％,具有较高的重复性和稳定性.本研究建立的方法不仅能够快速检测香鱼假单胞菌,还能够对该病原菌感染的动态变化进行定量研究,为大黄鱼香鱼假单胞菌感染导致的内脏白点病的早期诊断及防控提供一个新的检测技术.

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来源
《中国预防兽医学报》 |2015年第1期|35-39|共5页
作者
周涛; 张继挺; 王国良;
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作者单位

宁波大学应用海洋生物技术教育部重点实验室,浙江宁波315211;

宁波大学应用海洋生物技术教育部重点实验室,浙江宁波315211;

宁波大学应用海洋生物技术教育部重点实验室,浙江宁波315211;

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正文语种 chi
中图分类病原细菌;
关键词
rpoD基因; 香鱼假单胞菌; 荧光定量PCR; SYBR Green Ⅰ;

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