猪圆环病毒2型Cap蛋白与猪O型口蹄疫病毒VP1蛋白在杆状病毒中共表达及鉴定

王一平; 刘长明; 郭龙军; 唐青海; 刘丹; 危艳武; 李胜斌; 刘建波; 黄立平; 吴洪丽

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为在真核细胞中共表达猪圆环病毒2型(PCV2) Cap蛋白与猪O型口蹄疫病毒(FMDV) VP1蛋白,本研究将其各自编码基因克隆于杆状病毒双表达载体(pFastBacTM Dual)中构建重组转移质粒(pFBD-Cap-VP1),转化至DH10BacTM感受态细胞中制备重组杆粒(rBacmid-Cap-VP1),并转染Sf21昆虫细胞,拯救出能够共表达PCV2-Cap和FMDV-VP1蛋白的重组杆状病毒(rBac-Cap-VP1).SDS-PAGE和western blot检测结果表明,共表达的重组PCV2-Cap和FMDV-VP1蛋白产物的分子量分别为28 ku和30 ku,各占总蛋白含量的11.6％和3.4％,能够分别与PCV2和FMDV抗体发生特异性反应,表明共表达蛋白具有良好的反应原性.本研究为PCV2和FMDV基因工程二联亚单位疫苗的研制奠定了基础.%To co-express porcine circovirus type 2 (PCV2) capsid (Cap) protein and foot and mouth disease virus (FMDV) serotype O VP1 protein using baculovirus system, the genes of PCV2-Cap and FMDV-VP1 proteins were cloned into the dual expression vector (pFastBacTM Dual) and transformed into DHlOBacTM competent cells to construct recombinant bacmid of rBacmid-Cap-VP1. The recombinant baculovirus rBac-Cap-VP1 co-expressing PCV2-Cap and FMDV-VP1 was generated by transfection with rBacmid-Cap-VP1 into Sf21 cells. SDS-PAGE and western blot analysis showed that the co-expressed PCV2-Cap and FMDV-VP1 proteins were about 28 ku and 30 ku, and accounting for 11.6% and 3.4% in total proteins, respectively, which were able to react positively with either PCV2 or FMDV specific antibodies, indicating that they had good immunoreactivity. This study provides the basis for the development of bivalent subunit vaccines for control of both PCV2 and FMDV infections.

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来源
《中国预防兽医学报》 |2013年第1期|44-47|共4页
作者
王一平; 刘长明; 郭龙军; 唐青海; 刘丹; 危艳武; 李胜斌; 刘建波; 黄立平; 吴洪丽;
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作者单位

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室,黑龙江哈尔滨150001;

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室,黑龙江哈尔滨150001;

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中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室,黑龙江哈尔滨150001;

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中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室,黑龙江哈尔滨150001;

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正文语种 chi
中图分类家畜病毒学;
关键词
猪圆环病毒2型; 猪O型口蹄疫病毒; Cap蛋白; VP1蛋白; 共表达;

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