表达西尼罗病毒E蛋白重组腺病毒的构建及鉴定

张翠云; 赵晶; 陈韬; 孙恩成; 刘霓红; 杨涛; 徐青元; 王文世; 魏鹏

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表达西尼罗病毒E蛋白重组腺病毒的构建及鉴定

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To construct recombinant adenovirus expressing E protein of West Nile virus (WNV), the WNV E gene was cloned into the shuttle plasmid vector pshuttle-CMV. The resultant recombinant shuttle plasmid was linearized by Pme I and transformed into E.coli BJ5183 to construct the recombinant adenovirus plasmid of pAd-WNV-E by homologous recombination. The recombinant virus of rAd-WNV-E was generated by transfecting the Pac I linearized pAd-WNV-E into Ad-293 cells. The WNV E protein was efficiently expressed from the recombinant virus detected by western blot and immunofiuorescence assay, and the viral titration results showed that the replication ability of rAd-WNV-E was the similar to the wild type recombinant virus. These results provided the basis for further study on the recombinant virus vaccine against WNV.%为构建表达西尼罗病毒(WNV)E蛋白的重组腺病毒,本实验将WNV的E基因克隆至腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV中,经Pme Ⅰ酶切线性化后电转化于含有人5型缺陷腺病毒的骨架的BJ5183感受态大肠杆菌中进行同源重组,构建重组质粒pAd-WNV-E;将其经Pac Ⅰ酶切线性化后通过脂质体介导转染于人胚肾细胞Ad-293细胞,制备重组腺病毒rAd-WNV-E;经western blot以及间接免疫荧光鉴定表明WNVE蛋白在Ad-293细胞中获得有效表达.病毒滴度测定试验结果显示,该重组腺病毒与野毒型腺病毒复制能力相近.该重组腺病毒的构建为进一步研制表达WNVE蛋白的重组腺病毒的疫苗奠定了基础.

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来源
《中国预防兽医学报》 |2013年第4期|267-270|共4页
作者
张翠云; 赵晶; 陈韬; 孙恩成; 刘霓红; 杨涛; 徐青元; 王文世; 魏鹏;
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作者单位

湖南农业大学动物医学学院,湖南长沙410128;

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室,黑龙江哈尔滨150001;

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室,黑龙江哈尔滨150001;

湖南农业大学动物医学学院,湖南长沙410128;

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室,黑龙江哈尔滨150001;

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室,黑龙江哈尔滨150001;

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室,黑龙江哈尔滨150001;

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室,黑龙江哈尔滨150001;

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室,黑龙江哈尔滨150001;

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室,黑龙江哈尔滨150001;

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正文语种 chi
中图分类家畜病毒学;
关键词
西尼罗病毒; E蛋白; 重组腺病毒;

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