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结核杆菌多位点环介导等温扩增检测方法的建立

         

摘要

为建立一种快速、高敏感、高特异、鉴别结核分枝杆菌和牛分枝杆菌的方法,本研究根据大多数致病性结核分枝杆菌共有序列esat-6,结核分枝杆菌和牛分枝杆菌gyrB共有特异性序列,以及结核分枝杆菌种特异序列mtp40设计6对特异性引物对痰液中的结核分枝杆菌进行检测,并与鉴别培养基分离培养结果以及常规PCR鉴定结果进行比较.实验结果表明,建立的LAMP检测方法具有很高的特异性.可区分致病性结核分枝杆菌和非致病结核分枝杆菌,也可鉴别结核分枝杆菌和牛分枝杆菌.LAMP检测技术的灵敏度比经典PCR技术高100倍左右,可检测到7拷贝/反应.另外,用3种方法同时检测样品发现,LAMP与细菌培养的符合率为90.91%.LAMP与常规PCR检测结果的符合率为100%.LAMP检测方法可以在流行病学调查及现场快速诊断方面广泛应用,并为临床治疗提供依据.

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