猪IL-10的原核表达及其单克隆抗体的制备

刘婷婷; 王兴龙; 李玉峰; 宋艳华; 张国龙; 姜平

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猪IL-10的原核表达及其单克隆抗体的制备

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为了制备猪IL-10的单克隆抗体(MAb),本研究根据GenBank登录的猪白细胞介素10(PIL-10)基因序列设计两对特异性引物,利用套式PCR扩增PIL-10成熟蛋白编码基因(490 bp),构建原核表达裁体pET28a-PIL-10,并转化至大肠杆菌BL21,经IPTG诱导,SDS-PAGE和western blot分析鉴定,证明PIL-10重组蛋白获得表达.提取纯化该重组蛋白包涵体,免疫BALB/c小鼠,经过3次细胞融合,间接ELISA方法筛选,获得一株能稳定分泌抗猪IL-10 MAb的杂交瘤细胞,将其命名为2F4.Western blot结果证明该MAb能够与重组蛋白发生特异性反应.间接ELISA测定细胞上清抗体效价为1:1 024,腹水效价为1:128 000,该MAb为IgG3亚型.轻链为λ型.杂交瘤细胞连续传代20代,分泌抗体的效价基本一致,从而为进一步建立猪IL-10的检测方法奠定了物质基础.

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来源
《中国预防兽医学报》 |2010年第4期|281-284|共4页
作者
刘婷婷; 王兴龙; 李玉峰; 宋艳华; 张国龙; 姜平;
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作者单位

南京农业大学,农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室,江苏,南京,210095;

南京农业大学,农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室,江苏,南京,210095;

南京农业大学,农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室,江苏,南京,210095;

南京农业大学,农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室,江苏,南京,210095;

南京农业大学,农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室,江苏,南京,210095;

南京农业大学,农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室,江苏,南京,210095;

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正文语种 chi
中图分类家畜免疫学;
关键词
猪IL-10; 原核表达; 单克隆抗体;

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