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犬源华支睾吸虫28 ku谷胱甘肽S-转移酶的原核表达与反应原性分析

         

摘要

本研究提取犬源华支睾吸虫总RNA,应用RT-RCR技术扩增28 ku谷胱甘肽S-转移酶(Cs28GST)编码基因,PCR产物经T/A克隆后,亚克隆入pET一30a(+)原核表达载体,构建重组质粒pET-Cs28GST,转化大肠埃希茵BL21(DE3),异丙基-B-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达;表达产物经十二烷基磺酸钠.聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、蛋白质印迹分析和鉴定,研究结果显示犬源Cs28GST编码区含有639个碱基,编码212个氨基酸残基,表达的蛋白以包涵体形式存在,大小约为30.6 ku,可被自然感染华支睾吸虫病犬的阳性血清识别,证明Cs28GST基因可在原核表达系统中高效表达并具有反应原性.

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