猪圆环病毒2型Cap 蛋白部分基因序列与大肠杆菌LTB成熟肽基因的融合表达及免疫原性研究

侯强红; 余兴龙; 李微; 李润成; 罗维; 刘浩; 尹恒; 刘忠华

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为了获得猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV-2)衣壳蛋白(Cap)基因3'端396 bp的片段与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)成熟肽编码区融合基因的高效表达,并检验重组蛋白的免疫保护效果.以含PCV-2全基因组的pMDT PCV-2质粒为模板,用PCR的方法扩增PCV-2 Cap基因,并将其克隆到pET28a(+)中,构建得到pET-Cap质粒,利用EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切切下Cap基因3'末端396 bp的片段,插入到pET-LTB原核表达质粒LTB基因的3'末端,从而构建pET-LTB△Cap原核表达质粒,将其转化大肠杆菌BL21 (DE3) pLysS后,用IPTG诱导重组菌,用SDS-PAGE电泳和Western blot检测诱导物.表达产物经初步纯化后用昆明系小白鼠做免疫保护实验.结果表明:pET-LTB△Cap重组融合表达质粒在大肠杆菌中实现了高效表达,融合蛋白分子量约为29 Ku,表达量约占菌体蛋白的36.67%,融合蛋白能被PCV-2阳性血清识别.攻毒后,所有小鼠临床表现正常.用PCR检测有1/8的免疫小鼠感染了PCV-2,而对照组8只小鼠都感染了PCV-2.PCV-2 Cap基因3'端396 bp的片段与LTB基因融合能实现高效表达,表达产物免疫的小白鼠可抵抗PCV-2的攻击.此研究为PCV-2基因工程疫苗的研究奠定了基础.

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来源
《中国预防兽医学报》 |2007年第11期|847-851|共5页
作者
侯强红; 余兴龙; 李微; 李润成; 罗维; 刘浩; 尹恒; 刘忠华;
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作者单位

湖南农业大学,动物医学学院,湖南,长沙,410128;

湖南农业大学,动物医学学院,湖南,长沙,410128;

湖南农业大学,动物医学学院,湖南,长沙,410128;

湖南农业大学,动物医学学院,湖南,长沙,410128;

湖南农业大学,动物医学学院,湖南,长沙,410128;

湖南农业大学,动物医学学院,湖南,长沙,410128;

湖南农业大学,动物医学学院,湖南,长沙,410128;

湖南农业大学,动物医学学院,湖南,长沙,410128;

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正文语种 chi
中图分类 S852.659.2;
关键词
猪圆环病毒2型; 大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB); 融合表达; 免疫原性;

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