猪流行性腹泻病毒CH/S株N蛋白基因的遗传变异及其原核表达

陈建飞; 冯力; 时洪艳; 孙东波; 白兴华; 佟有恩

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猪流行性腹泻病毒CH/S株N蛋白基因的遗传变异及其原核表达

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应用RT-PCR和nested-PCR方法扩增得到含猪流行性腹泻病毒CH/S株N蛋白基因的目的片段,并将其进行了克隆、序列测定及分析.CH/S株N蛋白基因含有一个长1 326 bp的ORF,编码由441个氨基酸残基组成的多肽,未发现碱基的插入和缺失.CH/S与CV777、Chinju99、JS-2004-2和LJB/03 N蛋白基因ORF的序列同源性分别为97.1%、96.8%、96.7%和96.5%;推导的氨基酸序列的同源性分别为97.7%、97.1%、97.1%和96.8%.以阳性质粒为模板,用分别含有BamH Ⅰ和Xho Ⅰ酶切位点的上、下游引物扩增得到ORF,其PCR产物经BamH Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切后定向克隆到pET-30a载体,构建的重组质粒命名为pET-30a-PN;将pET-30a-PN转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,在IPTG诱导下进行表达;SDS-PAGE结果表明表达出与预期大小相符的约54.4 Ku的重组蛋白,重组蛋白以包涵体形式存在;薄层扫描结果表明表达产物占菌体总蛋白的30.5%;Western blot分析表明表达的重组蛋白能与抗PEDV高免血清反应,说明该重组蛋白具有免疫学活性.

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来源
《中国预防兽医学报》 |2007年第11期|856-860895|共6页
作者
陈建飞; 冯力; 时洪艳; 孙东波; 白兴华; 佟有恩;
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作者单位

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室,黑龙江,哈尔滨,150001;

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室,黑龙江,哈尔滨,150001;

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室,黑龙江,哈尔滨,150001;

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室,黑龙江,哈尔滨,150001;

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室,黑龙江,哈尔滨,150001;

哈尔滨维科生物技术开发公司,黑龙江,哈尔滨,150001;

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正文语种 chi
中图分类基因的表达;
关键词
猪流行性腹泻病毒; N蛋白基因; 序列同源性; 重组蛋白; 免疫学活性;

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