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犬瘟热病毒A株核衣壳蛋白基因的克隆、表达及特性分析

         

摘要

根据GenBank中A 75/14株犬瘟热病毒(CDV)核衣壳蛋白(N)基因的核苷酸序列设计合成一对引物,经RT-PCR从病毒总RNA中扩增出1 600 bp的N基因,将其克隆于pMD18-T载体对其进行序列分析.结果表明A株CDV与其它毒株N基因序列的同源性较高.将N基因定向克隆于原核表达载体pPROEXTMHT,用重组质粒pPROEXTM HT-N转化感受态E.coli DH5a细胞,用IPTG于37℃诱导表达了分子量约63 Ku的重组N蛋白,占菌体总蛋白18%.经Western blot分析证实所表达的重组N蛋白具反应活性,将表达产物用ProBondTM纯化试剂盒进行了纯化.用所获得的重组蛋白免疫家兔制备的多克隆抗体可与CDV全病毒发生特异性反应,经琼扩试验测定其效价为1:16.本实验为下一步用重组N蛋白作为诊断用抗原,建立特异的CDV抗体检测方法奠定了基础.

著录项

  • 来源
    《中国预防兽医学报》 |2006年第4期|485-488|共4页
  • 作者单位

    中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室/实验动物中心,黑龙江,哈尔滨,150001;

    中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室/实验动物中心,黑龙江,哈尔滨,150001;

    中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室/实验动物中心,黑龙江,哈尔滨,150001;

    中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室/实验动物中心,黑龙江,哈尔滨,150001;

    中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室/实验动物中心,黑龙江,哈尔滨,150001;

    中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室/实验动物中心,黑龙江,哈尔滨,150001;

  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类 犬病毒;
  • 关键词

    犬瘟热病毒; 核衣壳蛋白; 表达; 反应活性; 多克隆抗体;

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