口蹄疫病毒实时荧光RT-RPA快速检测方法的建立

刘立兵; 王金凤; 张若曦; 石蕊寒; 韩庆安; 李睿文; 王建昌; 袁万哲

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为建立一种简单、快速、特异的口蹄疫病毒(FMDV)分子检测方法,本研究基于FMDV的3D基因,设计特异性引物和exo探针,建立了用于FMDV快速检测的等温实时荧光反转录重组酶聚合酶(Real-timeRT-RPA)方法.该方法采用便携式等温扩增仪-Genie Ⅲ实时监测扩增结果,40℃20 min即可完成检测.结果显示,FMDV RT-RPA方法能够特异性扩增FMDV 3D基因,而对水泡性口炎病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、脑心肌炎病毒等均无扩增;以体外转录的FMDV 3D RNA作为模板,该方法在95％置信区间检出下限为1.0×102拷贝/μL,组内和组间变异系数均小于1％;使用43份含有灭活FMDV的模拟临床样品分析显示,RT-RPA对FMDV的检出率为34.9％(15/43),略低于荧光定量RT-PCR的检出率(39.5％,17/43),而两种方法的符合率为95.3％(41/43).RT-RPA能够在6 min～16 min内完成检测,而实时荧光RT-PCR则需要30 min～51 min.本研究所建立的实时荧光RT-RPA方法反应快速,特异性强,灵敏性高,操作简单,结合便携式具有荧光检测功能的等温扩增仪Genie Ⅲ,组建了FMDV快速检测平台,在基层兽医部门,尤其在野外及疫情现场的FMDV检测中具有极大的应用潜力,为设备仪器有限的实验室和田间对FMDV的快速检测提供了一种有效的方法,对于条件有限地区FMD的防控具有重要意义.

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来源
《中国预防兽医学报》 |2019年第2期|168-173|共6页
作者
刘立兵; 王金凤; 张若曦; 石蕊寒; 韩庆安; 李睿文; 王建昌; 袁万哲;
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作者单位

河北省检验检疫科学技术研究院;

河北石家庄050051;

河北出入境检验检疫局技术中心;

河北石家庄050051;

河北省检验检疫科学技术研究院;

河北石家庄050051;

河北出入境检验检疫局技术中心;

河北石家庄050051;

河北省动物疫病预防控制中心;

河北石家庄050035;

河北省检验检疫科学技术研究院;

河北石家庄050051;

河北出入境检验检疫局技术中心;

河北石家庄050051;

河北省动物疫病预防控制中心;

河北石家庄050035;

河北农业大学动物医学院;

河北保定071001;

河北省检验检疫科学技术研究院;

河北石家庄050051;

河北出入境检验检疫局技术中心;

河北石家庄050051;

河北农业大学动物医学院;

河北保定071001;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类家畜病毒学;
关键词
口蹄疫病毒; 3D基因; exo探针; 实时荧光RT-RPA;

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