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非洲猪瘟病毒A137R蛋白多克隆抗体的制备与应用

         

摘要

非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)感染引起的一种高致病性病毒性传染病.为制备兔抗ASFV A137R蛋白多克隆抗体,本研究以ASFV Pig/HLJ/2018分离株基因组DNA为模板扩增ASFV A137R基因,将其克隆至原核表达载体pET-21a(+)中,构建重组表达质粒pET-21a-A137R,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞后经IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测结果显示,表达的A137R重组蛋白分子质量约15.0 ku,其主要以可溶形式表达.利用HisTrap亲和层析和凝胶过滤层析纯化获得高纯度的A137R重组蛋白,利用该纯化重组蛋白免疫新西兰大白兔,制备抗ASFV A137R蛋白多克隆抗体,经Protein G亲和层析介质纯化后经western blot、间接免疫荧光和免疫共沉淀试验检测结果显示,制备的兔抗ASFV A137R蛋白的多克隆抗体能特异性地识别HEK293T细胞中瞬时表达的ASFV Flag-A137R蛋白和ASFV感染猪肺泡巨噬细胞中表达的ASFV A137R蛋白.本研究为进一步探究ASFV A137R蛋白的功能、其在ASFV感染及致病性中的作用和诊断技术研究奠定了基础.

著录项

  • 来源
    《中国预防兽医学报》 |2021年第1期|60-64|共5页
  • 作者单位

    长江大学动物科学学院 湖北 荆州 434025;

    中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/基础免疫创新团队 黑龙江 哈尔滨 150069;

    中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/基础免疫创新团队 黑龙江 哈尔滨 150069;

    中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/基础免疫创新团队 黑龙江 哈尔滨 150069;

    中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/基础免疫创新团队 黑龙江 哈尔滨 150069;

    长江大学动物科学学院 湖北 荆州 434025;

    长江大学动物科学学院 湖北 荆州 434025;

    中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/基础免疫创新团队 黑龙江 哈尔滨 150069;

  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类 家畜免疫学;
  • 关键词

    非洲猪瘟病毒; A137R蛋白; 多克隆抗体;

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