帕利亚姆病毒可视化RT-LAMP检测方法的建立与应用

李占鸿; 肖雷; 宋子昂; 李卓然; 杨振兴; 李华春; 廖德芳; 杨恒

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帕利亚姆病毒(PALV)是一种严重危害反刍动物的虫媒病毒,为建立PALV可视化反转录-环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法,本研究根据我国分离的PALV株Seg-7基因序列设计特异性引物,优化反应条件,初步建立PALV的RT-LAMP检测方法.该方法的最佳反应温度为60C～64°C,最佳扩增时间为45 min;引物的最佳浓度为0.2 μmol/L(外引物)、0.8 μmol/L(内引物)、0.6 μmol/L(环引物).利用该方法检测PALV,蓝舌病病毒、流行性出血病病毒、阿卡斑病毒、口蹄疫病毒及非洲马瘟病毒,结果显示除PALV是阳性扩增结果外,其他病毒均无扩增反应,表明该方法特异性较强;将PALV Seg-7 ssRNA 10倍倍比稀释后作为模板,分别进行RT-LAMP、RT-PCR与qRT-PCR检测,结果显示RT-LAMP及qRT-PCR的检测限均为23.7拷贝/μL,比一步法RT-PCR高10倍.利用该方法对我国分离的21株不同血清型PALV株和21份PALV阳性血液检测,结果均为阳性;取40份采自哨兵牛的血液样品分别进行PALV的RT-LAMP与qRT-PCR检测,结果显示两种方法均检测到8份PALV核酸阳性样品,符合率为100％.本研究首次建立了PALV RT-LAMP检测方法,其特异性强、敏感性高、反应时间短、结果可视化,为我国开展PALV现场快速检测及其流行病学研究提供了技术支持.

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来源
《中国预防兽医学报》 |2021年第11期|1163-1170|共8页
作者
李占鸿; 肖雷; 宋子昂; 李卓然; 杨振兴; 李华春; 廖德芳; 杨恒;
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作者单位

云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒重点实验室云南昆明650224;

云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒重点实验室云南昆明650224;

云南农业大学动物医学院云南昆明650201;

云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒重点实验室云南昆明650224;

云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒重点实验室云南昆明650224;

云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒重点实验室云南昆明650224;

云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒重点实验室云南昆明650224;

云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒重点实验室云南昆明650224;

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正文语种 chi
中图分类家畜病毒学;
关键词
帕利亚姆病毒; RT-LAMP; 检测方法; 建立;

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