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包裹pcDNA3.1(-)/MAGE-3-HSP70壳聚糖纳米粒的制备及其特性

         
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背景:裸质粒DNA在基因治疗中因带负电荷,易被体内核酸酶降解,故无法实现有效转染,壳聚糖是自然界存在的可降解性阳离子多聚糖,能有效防止DNA被核酸酶降解,提高转染效率。目的:采用复凝聚法制备包裹pcDNA3.1(-)/MAGE-3-HSP70壳聚糖纳米粒,观察其相关特性。设计、时间及地点:对比观察实验,于2009-02/08在国家卫生部纳米生物技术重点实验室完成。材料:pcDNA3.1(-)/MAGE-3-HSP70由国家卫生部纳米生物技术重点实验室构建,壳聚糖(批号060306,脱乙酰度>90.0%,黏度<100mPa*s)由上海伯奥生物科技有限公司提供,B16细胞由中南大学肿瘤研究所惠赠。方法:采用复凝聚法制备包裹pcDNA3.1(-)/MAGE-3-HSP70壳聚糖纳米粒,将壳聚糖基因纳米粒转染B16细胞,利用反转录-聚合酶链反应检测体外转染效果;应用噻唑蓝评价壳聚糖基因纳米粒子的体外细胞毒性。主要观察指标:激光粒度仪测定壳聚糖基因纳米粒径、Zeta电位;紫外分光光度计检测包封率;凝胶阻滞实验观察壳聚糖和质粒DNA的聚合;DNaseⅠ的保护试验分析壳聚糖基因纳米粒抗核酸酶降解能力。结果:壳聚糖基因纳米粒的平均粒径约为223nm,Zeta电位为16mV;DNA包封率为92.3%,B16细胞转染实验显示其效率与Lipofectamine2000相近,而其毒性远低于Lipofectamine2000。结论:壳聚糖纳米粒子可高效装载质粒DNA转染B16细胞,而且对细胞基本无毒。

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