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不同浓度尿酸对体外培养人脐静脉血管内皮细胞增殖过程的影响(英文)

         
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摘要

背景:近年对尿酸特别是其与心血管疾病的研究较多,但多集中在流行病学领域,从细胞学角度探讨尿酸对内皮细胞影响的研究并不多见。目的:观察不同浓度的尿酸对体外培养的人脐静脉内皮细胞株(ECV304)丙二醛,一氧化氮及3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐的影响。设计:以人脐静脉内皮细胞为观察对象,随机对照实验。单位:解放军第四军医大学西京医院内分泌科。材料:脐静脉内皮细胞株ECV304由解放军第四军医大学免疫教研室提供;DMEM低糖培养基,美国Gibco公司生产;胎牛血清,北京元亨圣马生物技术研究所生产;胰蛋白酶,美国Gibco公司生产;3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐,华美公司生产;二甲基亚砜(DM-SO),分析纯,天津博迪化工有限公司生产;尿酸,Sigma公司生产。一氧化氮测试盒,丙二醛测试盒,南京建成公司生产。普通倒置显微镜、酶联免疫检测仪IX70型倒置显微镜,日本Olympus生产;酶联免疫检测仪,华东电子管厂生产。方法:实验于2003-12/2004-04在第四军医大学内分泌科和烧伤科进行。内皮细胞的复苏、培养、传代、接种均参考司徒镇强等主编的《细胞培养》中的方法进行。用无血清DMEM培养24h使细胞同步化于G0/G1期,分4组实验,分别为对照组,低浓度尿酸组,中浓度尿酸组和高浓度尿酸组,每组分为24h,48h和72h3个时间点,每个时间点8个样本。对照组,低浓度尿酸组,中浓度尿酸组和高浓度尿酸组分别加入含有0mmol/L,0.1mmol/L,0.2mmol/L,0.4mmol/L尿酸的5%的血清培养液,然后将培养板放入37℃,体积分数为0.05的CO2孵箱中孵育。在24h后检测丙二醛,一氧化氮及3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐,48h及72h分别再检测3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐。主要观察指标:各组人脐静脉内皮细胞增殖情况及一氧化氮和丙二醛的含量。结果:随尿酸浓度增高,ECV304产生丙二醛的含量逐渐下降,分别为(2.97±0.05),(2.89±0.09),(2.78±0.10),(2.44±0.03)μmol/L。ECV304产生一氧化氮的量分别为(6.86±1.41),(12.5±2.7),(18.9±1.8),(21.1±1.4)μmol/L,ECV304产生一氧化氮的量和3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐吸光度逐渐增加,细胞增殖以48h增加最为明显。结论:尿酸有抗氧化性,可促进血管内皮细胞的增殖及一氧化氮的释放。

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