香蕉束顶病毒海口分离物CP基因的原核表达、纯化及其抗血清制备

余乃通; 冯团诚; 王健华; 张雨良; 刘志昕

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用PCR方法从感染香蕉柬顶病毒(Banana bunchy top virus,BBTV)的香蕉植株幼嫩假茎和叶片总DNA中扩增外壳蛋白(coat protein,CP)基因.回收目的片段,经Xho Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切后与同样酶切的质粒载体pET30a(+)相连接,酶切验证及测序结果获得了含BBTV CP基因的重组质粒pET30a-CP.将重组质粒转化Codon plus表达菌,在25℃、0.4mmol/L IPTG条件下诱导6 h或过夜,经12%SDS-PAGE电泳分析可知,该莺组菌表达了一个与预期分子量大小一致的His-CP融合蛋白,约为30 ku,且主要以包涵体的形式存在.多次洗涤包涵体后得到高纯度的融合蛋白,用其免疫家兔,获得BBTV CP蛋白抗血清.间接EUSA法测定抗血清效价大于51 200.Westem blot分析表明,抗血清能与融合蛋白特异性结合.

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来源
《热带作物学报》 |2010年第5期|767-771|共5页
作者
余乃通; 冯团诚; 王健华; 张雨良; 刘志昕;
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作者单位

中国热带农业科学院热带生物技术研究所,农业部热带作物生物技术重点开放实验室,海南,海口,571101;

海南大学环境与植物保护学院,海南,海口,570228;

中国热带农业科学院热带生物技术研究所,农业部热带作物生物技术重点开放实验室,海南,海口,571101;

中国热带农业科学院热带生物技术研究所,农业部热带作物生物技术重点开放实验室,海南,海口,571101;

中国热带农业科学院热带生物技术研究所,农业部热带作物生物技术重点开放实验室,海南,海口,571101;

中国热带农业科学院热带生物技术研究所,农业部热带作物生物技术重点开放实验室,海南,海口,571101;

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正文语种 chi
中图分类 S463;
关键词
香蕉束顶病毒; GP基因; 原核表达; 纯化; 抗血清;

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