表达ESAT-6-gpi和IL-21的B16F10瘤苗的构建及其活性鉴定

何向锋; 王净; 余方流; 赵枫姝; 张洪义; 曹文虎; 窦骏

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为构建膜表达糖基化磷脂酰肌醇(GPI)锚定的结核杆菌早期分泌靶抗原6 kD(ESAT-6)和分泌IL-21的B16F10瘤苗并鉴定其活性,利用重叠PCR法构建pIRES-ESAT-6-gpi/IL-21重组质粒,以脂质体转染重组质粒到B16F10细胞,G418筛选出阳性克隆,用RT-PCR、免疫荧光、FCM和Western blot检测瘤苗细胞靶抗原表达,用瘤苗细胞培养上清刺激小鼠CD8+T细胞,检测瘤苗所分泌IL-21的生物学活性。结果表明,pIRES-ESAT-6-gpi/IL-21重组质粒DNA测序正确,B16F10-ESAT-6-gpi/IL-21瘤苗细胞目的基因ESAT-6表达于瘤苗细胞表面,增殖能力未受外源基因导入影响,分泌的IL-21具有生物学活性,为研究膜表达ESAT-6和分泌表达IL-21瘤苗的抗瘤效应奠定了基础。

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来源
《现代免疫学》 |2011年第5期|358-362|共5页
作者
何向锋; 王净; 余方流; 赵枫姝; 张洪义; 曹文虎; 窦骏;
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作者单位

东南大学医学院病原生物学与免疫学系;

东南大学附属中大医院妇产科;

南京210009;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类医学免疫学;
关键词
B16F10; IL-21; ESAT-6; GPI; 肿瘤疫苗;

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