猪NLRC5基因启动子克隆及生物信息学分析

刘翔; 尹灵丹; 薛美; 李亮; 赵立媛; 蒋成凡; 王文哲; 冯力; 刘平黄

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猪NLRC5基因启动子克隆及生物信息学分析

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为了构建猪NLR家族含CARD结构域5(NOD-like receptor family caspase recruitment domain family domain-containing 5,NLRC5)基因启动子双荧光素酶报告质粒,确认其活性,进而探索其转录调控机制,试验采用PCR方法从猪睾丸细胞(swine testicular cell,ST细胞)中扩增出猪NLRC5基因启动子,将其与pGL3-Basic载体连接,测序正确后将猪NLRC5基因启动子双荧光素酶报告质粒转染至ST细胞中,通过双荧光素酶报告检测试剂盒检测荧光素酶的表达活性,并使用生物信息学软件预测该基因启动子区域的CpG岛、调控元件及转录因子结合位点。结果表明:试验成功构建猪NLRC5基因启动子双荧光素酶报告质粒,该质粒的相对荧光素酶活性极显著高于pGL3-Basic载体(P<0.01)。NLRC5基因启动子区域中存在2个CpG岛,TATA box、CCAAT box和GC box等多种调控元件,以及IRF1、IRF3、STAT1、STAT3、STAT4和NF-κB转录因子结合位点。说明猪NLRC5基因的表达可能受甲基化的影响,同时也可能受顺式作用元件以及干扰素和NF-κB相关转录因子的调控。

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来源
《黑龙江畜牧兽医》 |2021年第13期|1-5|共6页
作者
刘翔; 尹灵丹; 薛美; 李亮; 赵立媛; 蒋成凡; 王文哲; 冯力; 刘平黄;
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作者单位

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所;

哈尔滨150069;

中国农业大学动物医学院;

北京100193;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类猪;基因工程（遗传工程）;
关键词
启动子质粒; 双荧光素酶; NLR家族含CARD结构域5(NLRC5)基因; 启动子调控元件; 转录因子结合位点; 生物信息学;

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