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黑琴鸡SSR-PCR反应体系的建立及优化

         

摘要

为了优化黑琴鸡简单重复序列(SSR)-PCR反应体系,试验以黑琴鸡基因组DNA为模板,采用L25(54)正交试验设计,对SSR反应体系中的4种关键因素(Taq DNA聚合酶、dNTP、引物、DNA模板)进行优化。结果表明:各因素水平变化对PCR反应影响的显著性依次为引物、Taq DNA聚合酶、dNTP、DNA模板,试验建立的黑琴鸡SSR-PCR最佳反应体系(20μL)为1 U Taq DNA聚合酶0.5μL,1.6 mmol/L dNTP 2μL,1.8μmol/L引物2μL,DNA模板40 ng,10×Buffer 2μL,加双蒸水至总体积为20μL。

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