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含五聚结构域的重组人β_2m-GFP蛋白的构建

         

摘要

本研究的目的是为得到表达人MHCⅠ类分子轻链蛋白β2m、β2m的C-末端与一段五聚体(penta)序列相连、且共价结合一段荧光素编码序列(GFP)的五聚重组人β2m-GFP蛋白。采用PCR扩增GFP基因及β2m基因片段,将其克隆到原核表达载体,并通过IPTG诱导目的基因在大肠杆菌中表达融合蛋白。提纯重组蛋白,并用SDS-PAGE和蛋白印迹法鉴定。结果表明,成功将GFP基因或人β2m基因片段插入含五聚结构域的PVT2载体。转化菌经诱导后,SDS-PAGE显示有新生的蛋白表达条带,分子量与预期的大小基本一致。重组蛋白用Ni-NTA柱提纯,纯化蛋白的蛋白质经SDS-PAGE分析可见单一条带。Western blot显示重组蛋白具有良好的免疫活性。因此,我们获得了含五聚结构域的人β2m-GFP在原核系统中的稳定表达,为后续深入研究含五聚结构域的重组MHCⅠ类分子的功能及应用奠定了基础。

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