重组鲨鱼血管生成抑制因子功能活性区蛋白纯化工艺的优化

彭雯丹; 罗勇; 陈钧; 王亚玉; 黎美香; 谢秋玲

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重组鲨鱼血管生成抑制因子功能活性区蛋白纯化工艺的优化

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目的优化重组鲨鱼血管生成抑制因子(Shark angiogenesis inhibition factor,SAIF)功能活性区(aSAIF)蛋白的纯化工艺。方法利用离子交换层析和镍柱亲和层析对带有组氨酸标签的融合蛋白His6-SUMO-aSAIF进行纯化。纯化后的融合蛋白经SUMO蛋白酶切除小分子泛素样修饰蛋白(Small ubiquitin-related modifier,SUMO)标鉴,再经镍柱二次亲和层析获得非融合aSAIF蛋白,采用WST-8法对其进行血管生成抑制活性检测。结果优化的纯化工艺参数为:离子交换层析采用0.2 mol/L的NaCl进行洗脱;亲和层析的洗脱液为20 mmol/L磷酸盐,500 mmol/L NaCl,250 mmol/L咪唑,pH 7.4;SUMO蛋白酶与融合蛋白的最佳酶切比例为1∶480,酶切时间为1 h。最终获得的aSAIF蛋白纯度可达95%,具有较好的抑制血管内皮细胞增殖的活性,且呈剂量依赖性。结论已成功建立了aSAIF的纯化工艺,为后续大规模生产及抑制血管生成机制的研究奠定了基础。

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来源
《中国生物制品学杂志》 |2012年第6期|770-773|共5页
作者
彭雯丹; 罗勇; 陈钧; 王亚玉; 黎美香; 谢秋玲;
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作者单位

暨南大学生命科学技术学院;

广州510632;

广东省生物工程药物重点实验室;

广州510632;

基因工程药物国家工程中心;

广州510632;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类生物疗法;免疫学技术、设备及实验方法;
关键词
鲨鱼血管生成抑制因子; 纯化工艺; 优化;

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