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^pSP偶联低分子量壳聚糖介导siRNA对靶基因的沉默

         
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放射性标记针对荧光素酶报告基因(Luc)的siRNA,与不同分子量的壳聚糖(CS)制备成CS/siRNA复合物,转染可稳定表达Luc基因的MDA-MB-231/Luc人乳腺癌细胞系.与较大分子量壳聚糖相比,低分子量壳聚糖(LMWC)与siRNA形成的复合物具有更小的粒径及更强的siRNA转染能力,但是对靶基因的沉默效应却不高.其原因归咎于低分子量壳聚糖(Mr为2 000或5 000,LMWC)与siRNA间强烈的电荷引力限制了siRNA在细胞内的释放.合成基序为LLLRRRDNEY*FY*VRRLL的可磷酸化短肽(p SP)与LMWC相偶联,合成p SP-LMWC.分别对siRNA及p SP-LMWC进行FAM及Dabcyl标记,利用FRET技术检测细胞内p SP-LMWC与siRNA的解离.结果表明,p SP修饰可大幅度增加siRNA与LMWC在细胞内的解离,成为有功能的游离形式,从而显著下调靶基因的表达.本文的结果表明,低分子量壳聚糖具有良好的siRNA递送能力,促进其与siRNA在细胞内的解离可有效提高siRNA对靶基因的沉默效应.

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