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siRNA介导Sry基因沉默对小鼠胚胎性别决定基因表达的影响

         
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为研究Sry基因的调控网络,采用siRNA表达载体介导的RNAi技术,特异性地抑制睾丸决定因子Sry在小鼠胚胎中的表达,并观察Sry基因沉默后对在两性性腺分化中起重要作用的Wt1,Sf1,Dax1,Gata4,Sox9及Amh基因表达的影响.利用本课题组先前构建的siRNA重组表达载体(pSilencer4.1/Sry217及pSilencer4.1/Sry565),通过尾静脉注射法导入妊娠9.5天(9.5 dpc)的母鼠体内,在11.5 dpc时取胚胎,对性别鉴定为雄性的胚胎以RT-PCR法和Western-blot检测Sry基因的表达抑制效果,并同时用定量PCR法检测Wt1等上述性别决定相关基因表达变化情况.结果表明,注射干扰质粒后48 h Sry基因的mRNA和蛋白表达水平均降低,其中siRNA表达质粒pSilencer 4.1/Sry 565的抑制效果显著,可达到80%的抑制率.Sty基因沉默后,Wt1基因表达量显著升高;sfl,Daxl,Gata4,Sox9基因表达水平没有明显变化;Amh基因无表达.试验结果表明,Sry基因表达抑制会导致Wt1基因表达升高;另外,Sty基因激活Sox9基因的表达可能需要其他的辅助因子协同作用.

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