PCR法快速鉴定眼源性蜡样芽胞杆菌

袁珊珊; 楼永良; 钟毓红; 毛丽萍; 吴娅娅; 陈静思; 沙栋杰; 郑美琴

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PCR法快速鉴定眼源性蜡样芽胞杆菌

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目的建立一种快速、灵敏、特异的眼源性蜡样芽胞杆菌PCR检测方法,为蜡样芽胞杆菌性眼内炎患者的快速诊断提供依据。方法选择编码蜡样芽胞杆菌细胞毒素的cytK为靶基因设计引物,建立检测眼源性蜡样芽胞杆菌PCR;PCR产物用琼脂糖凝胶电泳鉴定,基因序列与GenBank比对验证扩增产物;将计数过的5株蜡样芽胞杆菌菌悬液,梯度稀释后分别提取DNA进行PCR扩增,确定检测方法的灵敏度;分别用眼部常见感染菌金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、甲型溶血性链球菌、化脓性链球菌、藤黄微球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、普通变形杆菌和白假丝酵母菌以及枯草芽胞杆菌DNA进行特异性试验;进一步将该方法应用到人工污染致病蜡样芽胞杆菌的房水标本中,并分析其灵敏度。结果 5株分离自眼内炎患者标本中的蜡样芽胞杆菌均扩增出360 bp左右的DNA片段,测序结果与GenBank比对一致;该法检测在5 h内完成,方法灵敏度达7.5～15.0 CFU/mL;其他菌株检测未出现非特异性扩增;对模拟感染房水标本的PCR鉴定结果与分离培养对比,二者符合率为100%,模拟标本的检测灵敏度与纯菌结果一致。结论 cytK基因为靶基因的PCR用于眼源性蜡样芽胞杆菌的快速检测,具有简便、快速、敏感、特异等特点,为眼内炎患者的快速诊断提供依据,在实际检验工作中有良好的应用前景。

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来源
《中国微生态学杂志》 |2012年第3期|273-277|共6页
作者
袁珊珊; 楼永良; 钟毓红; 毛丽萍; 吴娅娅; 陈静思; 沙栋杰; 郑美琴;
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作者单位

温州医学院检验医学院;

浙江温州325027;

温州医学院附属眼视光医院;

浙江温州325027;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类实验室诊断;
关键词
蜡样芽胞杆菌; cytK基因; 聚合酶链式反应; 眼内炎; 快速检测;

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