可磷酸化短肽偶联壳聚糖促进CS/DNA转染效率

任玉平; 赵荣兰; 孙蓓; 左爱军; 梁东春

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可磷酸化短肽偶联壳聚糖促进CS/DNA转染效率

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合成基序为LLLRRRDNEY*FY*VRRLL的短肽(pSP),其中含有两个可被JaK2蛋白激酶磷酸化的酪氨酸残基.将此短肽与壳聚糖(CS)相偶联,体外磷酸化及DNA释放实验检测哺乳动物细胞裂解液对短肽的磷酸化及pSP-CS/DNA复合物中DNA释放的影响.放射性标记DNA转移实验验证pSP-CS/DNA复合物的入胞能力后,将荷荧光素酶或GFP报告基因的质粒与pSP-CS制成pSP-CS/DNA复合物,转染体外培养的C2C12小鼠成肌细胞,观察GFP的分布及细胞裂解液中的荧光素酶活性以表征转染效率.继而进行多种细胞系的转染,衡量pSP偶联的壳聚糖对不同种属细胞的转染效率.结果表明,哺乳动物细胞裂解液可有效地使短肽发生磷酸化,并藉此促进DNA与壳聚糖载体的解离.以pSP修饰的壳聚糖进行转染时,细胞裂解液的荧光素酶活性可达普通壳聚糖转染的两倍,细胞中GFP的含量也明显增加.据此推论,短肽被磷酸化后产生电荷属性的改变,促进DNA与壳聚糖载体的解离从而显著提高壳聚糖的转染效率.

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来源
《中国生物化学与分子生物学报》 |2010年第8期|734-739|共6页
作者
任玉平; 赵荣兰; 孙蓓; 左爱军; 梁东春;
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作者单位

天津医科大学内分泌研究所/代谢病医院;

天津市激素与发育重点实验室;

天津300070;

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正文语种 chi
中图分类基因工程（遗传工程）;
关键词
短肽; 磷酸化; 壳聚糖; 解离; 转染效率;

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